İfa yöntemi ile tespit edilen HIV antikorları. HIV için ELISA hangi durumlarda ve ne zaman yapılır? Antikorlar nelerdir

HIV enfeksiyonu, insan bağışıklık sistemine zarar veren ve geç teşhisi nedeniyle tehlikeli olan, uzun asemptomatik dönemi olan ciddi bir viral hastalıktır. Genellikle "HIV" ve "AIDS" terimleri birbirinin yerine kullanılır, aslında AIDS, süresi 1-2 yıl olan HIV enfeksiyonunun terminal (son) aşamasıdır. Yapılan araştırmalara göre enfeksiyon anından tedavi yokluğunda hastalığın terminal aşamaya girişine kadar ortalama 9-11 yıl sürüyor. Hastalığın ELISA veya HIV için PCR analizi ile erken teşhisi, vücutta insan immün yetmezlik virüsünün varlığına rağmen, zamanında antiretroviral tedaviye başlamanıza, hastalığın ilerlemesini durdurmanıza ve uzun yıllar boyunca tam bir yaşam sürmenize olanak tanır.

HIV bulaşma yolları:

korunmasız seks;
kan ve kan ürünlerinin transfüzyonu;
tıbbi müdahaleler sırasında steril olmayan aletlerin kullanılması;
tıbbi personelin steril olmayan aletlerle yaralanması;
perinatal enfeksiyon: hamilelik ve doğum sırasında virüsün bulaşması.

AIDS (HIV) testleri reçete edilir:

kazara cinsel temasla;
hamileliği planlarken ve hamilelik sırasında;
hastaneye yatış için hazırlıkta;
ağırlıkta keskin bir azalma ile;
bilinmeyen kaynaklı vücut ısısında uzun süreli bir artış ile.

HIV için hızlı kan testi

HIV, lentivirüslerin (Lentivirüs) bir alt ailesi olan retrovirüsler (Retroviridae) ailesine aittir. İnsan vücuduna girdikten sonra, bağışıklık sistemi hücrelerini, T yardımcılarını, makrofajları, dendritik hücreleri etkiler. Retrovirüs, RNA'sını, konakçı hücrenin genomuna eklenen bir DNA parçasına dönüştürür. Etkilenen hücre bölündüğünde, kızı viral bir genom alır. Virüsün vücuttaki enfekte hücrelerin yüzeyindeki antijenlerine, HIV enfeksiyonunun teşhisinin enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) yöntemine dayandırıldığı saptanması üzerine antikorlar üretilir. Analizin, enfeksiyon olduğu iddia edilen andan 1.5 - 3 ay sonra alınması tavsiye edilir, önceden ELISA testi bilgilendirici değildir. Hemotest laboratuvarı alternatif bir yöntem olan Real-Time PCR (real-time PCR) kullanır ve bu da HIV'e karşı antikorları değil, virüsün vücutta kendisini tespit eder. Bu yöntem, yüksek duyarlılığı ve güvenilirliği ile, kanda antikor bulunmadığında potansiyel enfeksiyon anından itibaren 10 gün (ortalama) sonra virüsün tek partiküllerinin bile tespit edilmesini sağlar.

"seronegatif pencere" sırasında virüsü tespit etmek için;
şüpheli bir immünoblot sonucu ile;
virüsün genotipini belirlemek için - HIV-1 veya HIV-2;
vücuttaki viral yükü kontrol etmek için;
anne HIV ile enfekte ise yenidoğanların HIV durumunu belirlemek için;
kan transfüzyonundan sonra.

Anonim HIV testi

38-FZ sayılı Rusya Federasyonu Federal Yasasının 2. maddesinin 8. maddesine göre, bir hasta anonim olarak HIV testi yapabilir ve ifşa edilmeyen bireysel bir sipariş numarası kullanarak bir sonuç alabilir. Herhangi bir nedenle Hemotest Laboratuvarı bölümlerinden birinde muayene için gelemeyenler için, anonim olarak alınan numunenin daha sonra kaydedilmesiyle birlikte kan almak için hemşire ziyaretinin hizmetini kullanmanızı öneririz.

Dikkatini şuna çekmek:aIDS (HIV) için anonim testlerin sonuçları profesyonel muayeneler, hastaneye yatış veya poliklinikte ilgilenen hekime sunum için kullanılamaz.

HIV testinin sonuçları, sonuçlarına bakılmaksızın, sadece hastanın laboratuvar departmanına yaptığı kişisel ziyaretle verilir. Küçükleri (14 yaşın altındaki) incelerken - sırayla belirtilen yasal temsilci.

Sonuçlar, bir sözleşmenin, bir tahminin ve siparişte belirtilen hastanın veya hastanın temsilcisinin kimliğini kanıtlayan bir belgenin sunulması üzerine yayınlanır.

Araştırma sonuçları telefon veya e-posta ile bildirilmez.

HASTANEYE HAZIRLIK YA DA SAĞLIK HİZMETİNE SUNULMAK İÇİN HAZIRLIK AMACIYLA HIV ANALİZİ YAPILIRSA, YAPILACAK BAŞVURULARIN KAYDEDİLMESİ, aşağıdaki verilerin zorunlu olarak sağlanmasıyla hasta tarafından yapılır:

1) Moskova ve Moskova bölgesi sakinleri için

Ad Soyad
Gün, ay ve doğum yılı
Kayıt Bilgileri
Pasaport
Sigorta poliçesi (sigorta poliçesinin serisi ve numarası, sigorta şirketinin adı).

2) Rusya Federasyonu'nun diğer bölgelerinde yaşayanlar ve yabancı vatandaşlar için ek olarak - pasaportun fotokopisi (taraması).

Ad Soyad
Gün, ay ve doğum yılı
Kayıt Bilgileri
Sigorta poliçesi (sigorta poliçesinin serisi ve sayısı, sigorta şirketinin adı)
Pasaportun fotokopisi (taraması)

Kaç tane HIV testi yapılır?

ELISA test sonuçları, 1 iş günü sonra alınabilir, ancak iddia edilen enfeksiyon tarihinden itibaren en geç 1.5-3 ay sonra, PCR tanısının sonucu, iddia edilen enfeksiyon tarihinden itibaren 10 gün içinde bulunabilir. Testin Real-Time PCR yöntemi ile gerçekleştirilme süresi 3 iş günüdür.

Şu anda insanlarda HIV (immün yetmezlik virüsü) teşhisine özel önem verilmektedir. Hastalığın erken dönemde saptanması tedavi sürecine daha erken başlanmasına yardımcı olacak ve bu da hastanın yaşamındaki artışı önemli ölçüde etkileyecektir.

HIV testi geçildikten sonra, sonuçların kodunun çözülmesi kural olarak pozitif veya negatiftir. Aynı zamanda, birincil ve ikincil bir tanı var. Birincil ile - kişi ELISA kullanılarak kontrol edilir. Gerekirse HIV için ikinci bir kan testi yapılır. Olumlu ve olumsuz sonuç ne anlama geliyor? HIV testinin transkripti nasıl yapılır? Neden uyuşturucu bağımlısı olmayan ve alkolik bir kişinin kalıcı bir cinsel partneri var? Bağışıklık yetmezliği virüsünün analizini deşifre etmek olumlu ama şüpheli bir sonuç veriyor?

HIV hakkında

Hastalığın etken maddeleri 1. ve 2. tiptedir. Uzun bir süre boyunca, insanlarda varlıkları fark edilmez, sonra bağışıklık, her şeyden önce etkilenir, sonra diğer insan sistemleri.

İmmün yetmezlik virüsünün ana laboratuar tanı yöntemi ile HIV'e karşı antikorlar tespit edilir. Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA), yöntemin temelidir, duyarlıdır (% 99,5 ve üzeri) ve spesifiktir (% 99,8 ve üzeri). Ek olarak, ELISA kullanılarak HIV teşhis edilirken, p24 antijeni belirlenir.

Her test sisteminin farklı göstergeleri vardır, bununla bağlantılı olarak viral zarfların çeşitli protein yapılarını belirlerler. HIV'in etken maddeleri iki alt tiptedir: 1. ve 2. veya HIV-1 ve HIV-2. Viral parçacıklar, bir dış fosfolipid zarı ile küresel bir şekle benziyor. 1. alt tip için aşağıdaki moleküler ağırlığa sahiptir: gp120, gp41, gp160. 2. alt tür gp105, gp36, gp140 içerir. Virüsün iç zarfı için moleküler ağırlık da bilinmektedir. 1. alt tip için bunlar p55, p17, p24'tür. 2. için - p16, p25, p55.

Bir virüsü tanımlamak için her bir test sistemi için üç ana protein grubu vardır.

Genel olarak ELISA sonucu şu şekilde olabilir:

olumsuz;
yanlış pozitif;
yanlış negatif;
şüpheli veya belirsiz.

Antijenler, antikorlar teşhis yöntemleriyle tespit edilir.

Normal bir sonuç hakkında

Norm - bu ne anlama geliyor? HIV testi negatif olduğunda bu normal kabul edilir.

1. En yeni nesil ELISA test sistemleri, HIV ve protein partiküllerine karşı antikorların varlığını belirleyebilir. Analiz normalse, kanda patojenin antikorları ve protein parçacıkları bulunmaz. Ancak doğumdan 3 ay önce enfeksiyon riski yoksa bir kişinin buna dayanarak sağlıklı olduğundan emin olmak mümkündür. Aksi takdirde bir süre sonra tekrar testlerin tekrar edilmesi gerekir.

HIV'in ancak 6 ay sonra tespit edildiği durumlar olmuştur. Bu nedenle, sonuç negatifse ve HIV bulaşmış bir hastayla temas varsa, güvenilirlik için testlerin üç, dört ve altı ay sonra tekrarlanması gerekir. ELISA'nın olumsuz bir sonuç verdiği ve kişinin açıkça HIV belirtilerinin varlığından şüphe ettiği, sınava tekrar girmesi önerilir. Analizin erken zamanlaması veya insan faktörleri nedeniyle hatalı bir sonuç mümkündür.

2. Immunoblot ile negatif bir sonuç elde edilmişse, şu anda bu en güvenilir analizdir.

Bir kişinin bir bağışıklık yetmezliği virüsü varsa ve sonuç negatifse, büyük olasılıkla bu, testin herhangi bir aşamasında meydana gelebilecek tıbbi bir hatadır. Üç ve altı ay sonra immünoblotu tekrarlarken sonuç negatifse, endişelenecek bir şey yoksa, bu normu gösterir. Ve ancak negatif bir immünoblot yanıtından sonra, HIV testinin negatif olduğuna dair bir sertifika verilecektir.

3. Yetişkinlerde immün yetmezlik virüsünün teşhisi sırasında PCR araştırması son derece nadiren kullanılır ve bu yöntem yeni doğan çocuklar için kullanılır.

Negatif bir sonuç da burada norm olarak kabul edilir.

4. Sosyolojik araştırmalara göre, birçok kişi hızlı bir HIV testi kullanıyor. Negatif bir şerit gördüklerinde insanlar sakinleşir ve HIV enfeksiyonunun tüm belirtilerine sahip olsalar bile tıbbi bir tesise gitmeyi reddederler. Ancak ekspres testin doğruluğunun yüzde seksen beş olduğunu bilmeniz gerekir. Ek olarak, evde yanlış bir şekilde yapabilirsiniz veya depolanması için koşullar ihlal edilir. Sonucun yanlış olması daha da muhtemeldir. Alkali maden suyu testinden 8 saat önce yutulması bile test sonucunu etkileyecektir. Bu nedenle, insanlarda immün yetmezlik virüsünün, negatif olsa bile ekspres test temelinde bulunmadığı gerçeği, her zaman doğru bir ifade olmaktan uzaktır.

Kod çözme analizi

İnsanlarda test yapıldıktan sonra, genellikle araştırma sonucunun nasıl deşifre edileceği, HIV için olumlu bir sonuç alınırsa ne yapılacağı sorusu ortaya çıkar.

1. ELISA, bu test sistemine göre antijenlere karşı tüm veya neredeyse tüm antikorların varlığını gösterdi ise, bu HIV için pozitif bir test anlamına gelir. İkinci serolojik enzim bağlantılı immünosorbent testinden sonraki yanıt pozitifse, bir immünoblot yapılmalıdır. Sonuçlarını deşifre etmek daha doğru olacaktır. Enzim immunoassay pozitif sonuç verdiyse, bir sonraki immunoblot analizi de HIV varlığını gösterdi, ardından nihai sonuç kondu. Testler deşifre edildiğinde, pozitif bir HIV testinin şu şekilde belirlendiğini bilmeniz gerekir:

% 60 ila% 65 enfeksiyondan 28 gün sonra;
% 80 - 42 gün sonra;
% 90 - 56 gün sonra;
% 95 - 84 gün sonra.

HIV'e yanıt pozitifse, bu virüse karşı antikorların tespit edildiği anlamına gelecektir. Yanlış pozitif yanıtı önlemek için, testleri tekrar, tercihen iki kez geçmek gerekir. İkiden iki testi geçerken veya ikisinde 3 testi geçerken immün yetmezliğe karşı antikor tespit edilirse, sonuç pozitif olarak kabul edilir.

P24 antijeni, enfeksiyon gününden itibaren 14 gün gibi erken bir zamanda kanda tespit edilebilir. Enzim immunoassay yöntemi kullanılarak, bu antijen 14 ila 56 gün arasında tespit edilir. 60 gün sonra artık kanda kalmaz. Ancak vücutta AIDS oluştuğunda bu p24 proteini kanda yeniden büyür. Bu nedenle, enzim immunoassay test sistemleri enfeksiyonun ilk günlerinde HIV'i tespit etmek veya hastalığın nasıl ilerlediğini belirlemek ve tedavi sürecini izlemek için kullanılır. Enzime bağlı immünosorbent testinin yüksek analitik duyarlılığı, birinci alt tipin HIV'sine sahip biyolojik materyaldeki p24 antijenini 5 ila 10 pkg / ml konsantrasyonda, ikinci alt tipteki HIV 0,5 ng / ml veya daha az olarak tespit eder.

2. Enzime bağlı bir immünosorbent testinin şüpheli bir sonucu, teşhisin bir yerde yapıldığı, kural olarak sağlık çalışanlarının bir şeyi karıştırdığı veya kişinin enfeksiyon belirtileri olduğu ve sonucun negatif olduğu, bu da şüphe uyandıran kişinin ikinci bir test için gönderildiği anlamına gelir.

3. Hastanın aşağıdaki şartlarında kan testleri yapıldığında yanlış pozitif sonuç anlaşılır:

gebelik;
bir kişinin hormonal bir bozukluğu varsa;
uzun süreli immünosupresyon ile.

Bu durumda analiz nasıl deşifre edilir? En az bir protein tespit edilirse yanlış pozitif sonuç verilir.

P24 antijeninin bireysel varyasyonlara çok bağımlı olması nedeniyle, bu yöntemi kullanarak, enfeksiyonun ilk döneminde hastaların% 20 ila% 30'u tespit edilir.

Polimeraz zincir reaksiyonu yöntemiyle araştırma sonrası göstergeler hakkında

Bu yöntemi kullanarak, HIV RNA ve DNA, enfeksiyondan hemen sonra tespit edilir. Ancak kesin teşhis yapılmaz, diğer yöntemlerle zorunlu onay gerektirir. "PCR sonucunun deşifre edilmesine yardımcı olun." - çoğu zaman böyle bir istek duyabilirsiniz. Bir immün yetmezlik virüsü tespit edilirse bu durumda ne yazılır? PCR kullanılarak yapılan bir analizin sonucuna yanıt verirken, bir mililitre kandaki RNA kopyalarının sayısı belirtilir. Aşağıdaki tablo, kandaki kantitatif özelliklere bağlı olarak sonucu göstermektedir.

AIDS testi yaparken yukarıdaki tabloyu kullanmak iyidir çünkü hastalığın evresini kolayca belirleyebilir.

Çeşitli test sistemlerini dikkate alan bu tablolar, her bir enzim immünolojik testi ve immünoblotlama yöntemi için laboratuvar odalarındadır.

Sık sık sorulan: "CD4 göstergesine göre polimeraz zincir reaksiyonu yöntemiyle çalışmadan sonra cevabı deşifre edin." Normal CD4 hücre sayısı, mililitre biyolojik materyal başına 600 ila 1900 hücredir. Bu, HIV negatif durumuna karşılık gelir. Ancak bu göstergelerin sağlıklı insanlarda bile bu aralıkta olmadığını bilmeniz gerekir.

Modern dünyada, birçok laboratuvar zaten vücudu içindeki HIV enfeksiyonunun içeriğini tam olarak inceleyebileceğiniz iyi ekipmanlara sahiptir.

Temas halinde

Modern tıbbın gelişmesi sayesinde, bir doktorun tanı koyarken artık hastalıkların dolaylı belirtilerine odaklanmasına veya çok aşamalı laboratuvar testleri yapmasına gerek yoktur. İddia edilen ilk teşhisi doğrulayacak veya reddedecek tek bir analiz yapmak yeterlidir.

Bu yöntem, enzime bağlı immünosorbent testidir (ELISA) - bu çalışma, teşhisi büyük ölçüde hızlandıran çeşitli patolojilerde bulunan spesifik antikorları ve antijenleri tespit etmenize olanak tanır.

ELISA analizi, virüsle ve bunların miktarıyla savaşmak için vücutta belirli antikorların varlığını veya yokluğunu belirlemeye yardımcı olan böyle bir laboratuvar çalışmasıdır (yöntem).

Çalışmanın temeli, çeşitli virüslerin ve bakterilerin varlığını tespit etmeyi mümkün kılan bir antikor (zararlı nesneleri yok eden bir protein) olan doğal reaksiyon antijenidir (vücuda zararlı bir nesne).

ELISA, vücudun doğal bağışıklık tepkisidir - bir antikorun karşılık gelen bir antijenle etkileşimi. Böylece ELISA sırasında, materyalle birlikte test tüpüne antijenler veya antikorlar eklenir, ardından ortaya çıkan antijen-antikor komplekslerinin konsantrasyonu tespit edilir.

Eşleşmeler oluşursa, bağışıklık kompleksleri ortaya çıkar, ardından boyanın kombine molekülle enzimatik reaksiyonu meydana gelir. Belirtilen bileşiğin seviyesinin incelenmesinden sonra hastalığın tanımlanması enzimatik gösterge sırasındaki renk değişikliğinden kaynaklanmaktadır.

İmmünoglobulin türleri

İnsan immünoglobulinleri, ağır zincirlerin (H zincirleri) özellikleri, yapısı ve antijenik özellikleri bakımından birbirinden farklı birkaç sınıfa ayrılır. İnsanlar dahil tüm memelilerde, immünoglobulinlerin karşılık gelen sınıfa ait olduğunu belirleyen beş H zinciri izole edilir: G, M, A, D, E.

Her sınıf biyolojik özellikleri, antijenleri bağlama yeteneği ve molekülle bağın hızı ve gücü bakımından birbirinden farklıdır.

Her bir immünoglobulinin (lg) işlevleri farklıdır:

Vücuttaki miktar

Fonksiyonlar

Yarı ömür (günler)

değer

70%

Yenidoğanda pasif bağışıklık oluşturun;

bağışıklık tepkisi için gerekli

fagositozu iyileştirmek,

21-24

bulaşıcı hastalıklarda uzun süreli humoral bağışıklık sağlar

5-10%

fagositozu aktive etmek için gerekli,

5 antijen molekülünü bağlayabilen,

Birincil bir bağışıklık tepkisi sağlar

10-15

Toksinleri ve virüsleri etkisiz hale getirir

erken bağışıklık oluşumu için gerekli

İmmünoglobulinlerin ortaya çıkışı bir tür "zincir" - lgM lgG boyunca meydana gelir, bu, vücudun vücuttaki bir antijenin görünümüne nasıl tepki verdiğidir. Laboratuvar teşhisi sırasında, üç ana immünoglobulinin konsantrasyonu değerlendirilir - G, M, A.

İmmünoglobulinler için analiz alma endikasyonları

ELISA analizi her geçen yıl daha popüler hale geliyor.

Böyle bir çalışma teşhisi hızlandırır ve bu, aşağıdaki gibi patolojilerin tedavisi için çok önemlidir:

viral hepatit;
HIV enfeksiyonu;
sitomegalovirüs,
epstein Barr Virüsü,
herpes virüsü,
kızamıkçık,
tüberküloz,
salmonelloz,
dizanteri,
kene kaynaklı ensefalit,
helicobacter bakterileri,
borelyoz,
tetanos,
frengi,
difteri,
leptospirosis,
klamidya,
ureaplasmosis,
mycoplasmosis,
boğmaca.

flatworms
ascaris
histolik amip,
hepatik tremadler,
lamblia,
toksoplazma,
trichinella,
şans,
cestodosis.

ELISA, otoimmün patolojilerin ve habis neoplazmaların bir tür belirtecidir.

Test için hazırlık

Çalışmaya hazırlanırken aşağıdaki kurallara uymalısınız:

Doktorlar ayrıca yağlı ve kızartılmış yiyecekleri dışlamak için özel bir diyete bağlı kalmayı tavsiye ediyorlar ve eğer çalışma hepatit için yapılıyorsa, o zaman herhangi bir turuncu sebze ve özellikle turunçgiller yememek gerekir. Sabah aç karnına kan bağışlanmalıdır.

Yanlış bir pozitif analiz, yerine getirilmemiş önerilerden, özellikle de ELISA iletkenliğinin azalmasına bağlı olarak plazmada çok yüksek trigliserit konsantrasyonuna yol açan yağlı yiyeceklerin tüketiminden kaynaklanmaktadır.

Örnekleme prosedürü

Test materyali olarak tam kan, serum veya venöz kan plazması kullanılabilir. Materyal genellikle kübital venden tek kullanımlık bir iğne ve bir vakum tüpü kullanılarak alınır, 5-10 ml kan gerekir.

Sonucun doğruluğu için, doğru örnekleme tekniğine bağlı kalmak önemlidir - damarın kendisinin ve çevresindeki dokuların delinmesi tek bir manipülasyonda yapılmalıdır, bu nedenle, geniş çaplı kısa bir iğne kullanılır, böylece damarın zıt duvarı zarar görmez ve kırmızı kan hücreleri zarar görmez.

Ayrıca kırmızı kan hücrelerinin bütünlüğünü korumak için kanın test tüpünün duvarlarından aşağı akması gerekir.

Malzemenin depolanması sırasında olası iyonlaşmasından kaçınılmalı, ayrıca malzeme dezenfektan kalıntıları ile temas etmemelidir, bu nedenle sadece hastanın adı, malzemenin teslim tarihi ve saati ile işaretlenmiş tek kullanımlık bir plastik tüp kullanılır.

Test malzemesinin kısa süreli depolanması gerekiyorsa, 2-4 ° C sıcaklığa sahip bir soğutma odası kullanılır, daha uzun saklama gerekiyorsa malzeme -20 ° C sıcaklıkta dondurulur.

Analiz nasıl yapılır

Test materyalini hazırladıktan sonra laboratuvar asistanı gerekli manipülasyonlara geçer. Bunun için vücudun tahriş ediciye tepkisini tetikleme yeteneğine sahip bir dizi özel antijen kullanılır, bunlar çeşitli enfeksiyonlar, hormonlar, alerjenlerdir.

Beklenen "antijen-antikor" reaksiyonunun şeması şuna benzer:

Birincil reaksiyon, saptanabilir Ig (Ab) ve saflaştırılmış patojen antijenidir (Ag).
Ortaya çıkan immün kompleksleri tespit etmek için, bağlı spesifik Ig'nin bir antijen olarak hareket ettiği ve bir Ig konjugatının (Ab) bunun için bir antikor görevi gördüğü yeni bir immünolojik reaksiyon izler.
Son aşama, bir eşlenik molekül katalizörü ile birlikte enzimatik bir reaksiyondur. Substrat, reaksiyon sırasında renklendirilen bir kromojendir (renkli değildir) ve rengin yoğunluğu, numunedeki immünoglobulinin kantitatif göstergesi ile belirlenir.

Şu anda, çok çeşitli ELISA varyantları geliştirilmiştir; bunların net bir sınıflandırması yoktur. Genellikle yöntemler, onu heterojen ve homojen olarak ayırma temelinde düşünülür - analizin tüm aşamaları katı bir faz kullanılarak veya yalnızca bir çözelti kullanılarak gerçekleştirilir.

Modern klinik teşhis laboratuvarları genellikle heterojen (katı faz) bir ELISA kullanır; burada katı faz, bir polistiren mikroplakada bulunan özel kuyuların katı yüzeyinde antijenlerin veya antikorların emilmesi anlamına gelir, yöntem doğrudan ve dolaylı ELISA'ya bölünür.

Direkt ELISA ile, inkübasyon işlemi sırasında boş kuyuların yüzeyine eklenen antijen sabitlemeleri; bunun için test numuneleri 20-25 dakika temiz kuyucuklara yerleştirilir, bu antijenin yüzeyine yapışması için gereklidir. Bundan sonra gerekli antikor eklenir. Ayrıca malzeme, bağların oluşması için belirli bir süre kalır.

Antikorlar her zaman fazla eklenir, bu nedenle mevcut olsalar bile bağlanmamış antijenler numunede kalır ve hiç antijen yoksa, o zaman bağ olmayacaktır. "Fazladan" antikorları uzaklaştırmak için dekantasyon gerçekleştirilir, bundan sonra sadece antijen ile bir bağ oluşturmuş olan antikorlar kalır.

Bunu enzimatik bir reaksiyon izler - oyuklara bir enzim içeren bir çözeltinin eklenmesi, ardından ortaya çıkan bağlar renklendirilir.

Dolaylı ELISA yönteminde, daha önce enzimatik reaksiyonun substratı ile birleştirilen antikorlar kullanılır; bu durumda, antikorların antijene bağlanması, inkübasyon işlemi sırasında meydana gelir, ardından oyukların yüzeyindeki bağlar harekete geçirilir ve daha sonra eklenen konjugat ve substrat-kromojenik reaktif, reaksiyonu renklendirir.

Bu nedenle, dolaylı ve doğrudan yöntem arasındaki temel fark, malzemenin temiz kuyuların yüzeyine yapışması değil, plaka üzerinde hareketsizleştirilmiş antijene bağlanmasıdır.

Reaksiyonun seyri, özel cihazların kullanılmasıyla durdurulur, daha sonra her kuyu, bir fotometrik işleme tabi tutulur, ardından daha önce yürütülen kontrol numuneleri ile elde edilen sonucun karşılaştırmalı bir özelliği izlenir.

Numunede optik yoğunlukta bir artış tespit edilirse, test sonucundaki spesifik antikorların konsantrasyonu da fazla tahmin edilir.

Analiz hazır olduğunda

Çalışma fazla zaman almıyor, teşhis önlemlerine bağlı olarak kan alınmasından sonuca kadar 1 ila 10 gün sürüyor.

Test sonuçları ve yorumlanması

Hasta tarafından alınan teşhis formunda, belirli immünoglobulin sınıfları için negatif veya pozitif bir sonuç belirtilir ve çeşitli antikor sınıflarının kantitatif göstergesi de belirtilir.

Sonuçların çeşitli yorumlanması mümkündür:

IgM (+) (IgA, IgG tespit edilmedi) - kurtarma süreci;
IgM (-); IgG (+), IgA (+) - kronik bulaşıcı patoloji;
IgM, IgG, IgA (tümü değerli) - enfeksiyonlar için savunma mekanizmalarının eksikliği;
IgG (+/-) ve IgA (+/-), IgM (+) - akut süreç;
IgM (-), IgA (-), IgG (+) - enfeksiyon sonrası bağışıklık;
IgM, IgG, IgA (+) - akut aşamada kronik patoloji.

Bu nedenle, örneğin IgG ve IgM tespit edilirse, hasta aşağıdaki hastalıklardan birine sahip olabilir:

viral hepatit;
sitomegalovirüs;
herpes;
suçiçeği;
chlamydia;
stafilokok veya streptokok enfeksiyonu.

Bir enzim immunoassay genellikle hormonal çalışmalar için reçete edilir, normlar tabloda gösterilmiştir:

	Hormon adı	zemin	Norm
1	tiroglobulin	a / f	70 IU / ml'ye kadar
2	tiroksin	a / f	64-146 nmol / l
3	triiodotironin	a / f	1,8-2,8 nmol / l
4	Serbest tiroksin	a / f	11-25 pmol / l
5	Ücretsiz triiodritonin	a / f	4,49-9,3 pmol / l
6	Testosteron, dehidrotestosteron	F	0,5-10 mU / l

ELISA analizi, onkolojik patolojilerin oluşma olasılığını değerlendirmenize izin veren tanısal bir çalışmadır. Bununla birlikte, sonuçların yorumlanması sadece ilgili hekim tarafından yapılır.

Test sonuçlarının anlamı

ELISA, sifiliz dahil çeşitli genital enfeksiyon türlerini tespit etmek için uygundur ve genellikle hamile kadınları taramak için kullanılır.

Bu çalışma sayesinde, enfeksiyonun ne kadar önce meydana geldiğini ve çalışma sırasında hastalığın evresini öğrenebilirsiniz:

immünoglobulinler M, hastalığın süresini gösterir;
IgA - hasta 30 günden daha uzun süre önce enfekte oldu;
IgG, hastalığın "zirvesinde" veya tedavinin yakın zamanda sona erdiği anda tespit edilir.

Çalışma sırasında, negatif göstergeli plaka üzerindeki kuyular renksiz kalır ve pozitif olanlar parlak sarıya döner. Pozitif kuyucukların rengi kontrolün rengiyle eşleşmiyorsa, sonuç şüpheli kabul edilir ve yeniden test gereklidir.

Enzim immunoassay, HIV tanısında ilk adımdır. Analiz, iddia edilen enfeksiyondan hemen sonra yapılamaz; inkübasyon süresinin sonuna kadar beklemek gerekir (14 günden 6 aya kadar).

Analiz sırasında, HIV-1 ve HIV-2'ye karşı antikorlar belirlenir, genellikle daha sonraki bir tarihte ortaya çıkan G sınıfı antikorlar ve A ve M sınıfı antikorlar için bir araştırma, erken aşamalarda (inkübasyon döneminde) tespit edilebilir.

ilk test pozitifse, kan başka bir laboratuvar asistanı tarafından tekrar kontrol edilir;
tekrarlanan pozitif sonuç, malzemenin tekrar alınmasını gerektirir,
sonuç tekrarlandığında hastaya immünoblotlama atanır.

HIV enfeksiyonunun varlığına ilişkin nihai sonuç, yalnızca immünoblotlama sonucundan sonra verilir.

ELISA aynı zamanda tüberkülozun tanısal bir çalışması olarak da kullanılır, ancak hasta bu patolojiye karşı antikorlara sahip olsa bile, bu her zaman tüberkülozun varlığını doğrulamaz, bu nedenle ELISA genellikle açıklayıcı bir teknik olarak veya gizli bir ekstrapulmoner formun teşhisi için kullanılır.

IgG - istilanın kronik aşaması

IgA - enfeksiyon 30 günden daha önce meydana geldi

IgG - istila akut aşamada

IgG - tanıyı doğrular ve tedavinin etkinliğini gösterir

Analizin artıları ve eksileri

ELISA'nın doktorlar ve hastalar arasındaki popülaritesini açıklayan birçok avantajı vardır, bunlar:

sonucun yüksek doğruluğu,
uygun Fiyat,
hızlı sonuç,
hastalığın evresinin belirlenmesi,
zamanla hastalık kontrolü.

Bununla birlikte, avantajların yanı sıra, bir dezavantaj da vardır - nadir durumlarda, analiz yanlış pozitif veya yanlış negatiftir.

Sonuç neden güvenilmez olabilir

Spesifik antikorların üretimi ile karakterize olan belirli kronik hastalıkları (romatoid faktör) olan kişilerde analiz güvenilir olmadığından, teknik ihlallerden dolayı sonuçta hatalar ortaya çıkabilir.

Ayrıca, nihai sonuç, hastalar tarafından ilaç kullanımından ve metabolik bozukluklardan etkilenir. Bu nedenlerden dolayı, HIV ve onkopatoloji için pozitif bir sonuç, tekrarlı örnekleme gerektirir.

Araştırma maliyeti

ELISA fiyatı, tanı yönüne (ruble) bağlı olarak değişir:

hepatit 250-900;
virüsler - 250-1000;
HIV - 250-350;
helmintik istilalar - 280-900;
sifiliz -150-250;
mantar enfeksiyonları 400-500.

Makale tasarımı: Lozinsky Oleg

ELISA videosu

ELISA analizi nasıl yapılır:

İnsan immün yetmezlik virüsü enfeksiyonu ciddi bir tanıdır. Teşhis hataları, feci sonuçlara yol açabilir. HIV için ELISA testi en erişilebilir araştırma yöntemidir, ancak her durumda bilgilendirici değildir.

ELISA - enzime bağlı immünosorbent analizi. ELISA yönteminin amacı, biyolojik materyalde immün yetmezlik virüsüne karşı antikorları tespit etmektir. Yöntemi kullanarak, virüslerin kendilerinin değil, yalnızca varlıklarına yanıt olarak üretilen antikorların sıvıda varlığını izlemek mümkündür. Enzim immunoassay, cinsel yolla bulaşan hastalıkların teşhisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Cinsel yolla bulaşan enfeksiyonların belirlenmesine yardımcı olur.

Birkaç ELISA türü vardır: doğrudan sürüm, dolaylı sürüm, "sandviç" yöntemi. Her durumda, teknik, yabancı bir ajanın penetrasyonunun bir göstergesi olarak hizmet eden antikorların varlığının belirlenmesine dayanır. Bu "işaretleri" tanımlamak için biyolojik bileşen enzimlerle işlenir.

Enzime bağlı immünosorbent testi, antikorları% 96 - 98'lik bir doğrulukla belirler, hata önemsizdir. % 2-4'tür.

ELISA - HIV teşhisi için bir yöntem

HIV için ELISA testi, teşhisin ilk aşamasıdır. İmmün yetmezlik virüsünün antijenleri, p24, p15, p17, p31 proteinleri ve gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160 glikoproteinleridir.

Viral proteini tespit etmek için bir damardan bir kan örneği alınır. ELISA ile bir kan testine yönlendirilen bir numune, enzim immünoassay reaktifleri ile işlenir. Serum kandan izole edilir. Çalışma sırasında bulunursa, kanda zaten bir virüs olduğu anlamına gelir.

Kan, kesinlikle aç karnına verilir. Analizden 2 gün önce yağlı yiyecekler ve alkol tüketilmesi tavsiye edilmez. 14 gün içinde antiviral ilaç almayı bırakmalısınız.

Yöntemin avantajları:

nispeten düşük maliyet;
reaktiflerin yüksek stabilitesi;
yüksek hassasiyet;
kısa süre;
insan faktörünün minimum etkisi.

Modern ELISA test sistemleri dünya standartlarına göre üretilmektedir. Bu, yöntemin doğruluğunu artırır.

Enzim immunoassay her zaman güvenilir sonuçlar vermez. Virüs kan dolaşımına girdikten sonra, gizli (gizli) bir gelişim aşaması başlar. Virüslerin çoğalmaya başlaması ve antikorların henüz oluşmaması için geçen süre "seronegatif pencere süresi" olarak adlandırılır. Bu aşamada ELISA yapmak anlamsız. Bir enfeksiyon meydana geldiyse, sonuç olacaktır. Virüsün kendisini ne kadar çabuk algılayacağı vücuda kaç tane tehlikeli hücrenin girdiğine bağlıdır. Korunmasız cinsel ilişki veya kontamine kan transfüzyonu ile bu süre minimum olacaktır.

ELISA'nın HIV için yüksek güvenilirliği için çalışma üç kez gerçekleştirildi. İnsan immün yetmezlik virüsü için ELISA şartları:

olası temastan 6 hafta sonra,
3 ay içinde
altı ay sonra.

HIV için 4 nesil ELISA, enfeksiyonun erken aşamalarında en bilgilendirici yöntemdir. İddia edilen enfeksiyondan 1 ay sonra yapılabilir. Test, 3. nesil analoğa kıyasla maliyetlidir. Bu nedenle, devlet tıp kurumlarında ek bir teşhis yöntemi olarak kullanılmaktadır. Test 3 ücretsiz olarak yapılır.Eğer sonuçlarına göre kesin bir cevap vermek mümkün değilse, hasta 4-kuşak ELISA'ya yönlendirilir.

Önemli!Bir kez enfeksiyon kaptıktan sonra kişi bulaşıcı hale gelir. Henüz teşhisini bilmese bile başkaları için tehlikelidir!

ELISA, HIV antijenlerine karşı antikorlar tespit ederse, ek çalışmalar gereklidir. Bunlar arasında. Bu yöntemin güvenilirliği% 80'dir. PCR yardımı ile kan, meni ve vajinal akıntı incelenir. Biyolojik sıvı bir tıbbi reaktörde ayrıştırılır, ardından enzimlerle işleme tabi tutulur. Sonuç olarak, sıvı ortamdaki HIV hücrelerinin konsantrasyonunun ne olduğuna dair veriler elde edilir. Pozitif sonuçlu büyük hata (% 20) nedeniyle, ek bir immün blot işlemi gerçekleştirilir.

Teşhisin bir sonraki aşaması, Combo testidir (veya immün lekeleme). Bu, ELISA sonuçlarının 6 ay sonra belirsiz olması durumunda gerçekleştirilen oldukça hassas bir çalışmadır (% 98 kesinlik).

ELISA sonuçlarının yorumlanması

Şifre çözme süresi 24 ila 48 saat arasındadır. Acil olarak bilgi almanız gerekiyorsa (cerrahi müdahale gerekir), şifre çözme 2 saat içinde gerçekleştirilir. İl tıp merkezlerinde her zaman gerekli reaktifler bulunmaz. Numune tedavi yerinde alınır, ardından bölge merkezine sevk edilir. Bu şartlar altında sonuç 1 ila 2 hafta içinde bulunabilir.

Bir enzim immunoassay'in sonucu pozitif veya negatif olabilir; Başka seçenek yok.

Birincil ve tekrarlanan ELISA ile sonuç pozitif olsa bile, hasta HIV ile enfekte olarak tanınamaz. Yanlışlık olabilir. Yanlış pozitif sonucun nedenleri:

kronik hastalıklar;
uzun süreli bulaşıcı hastalıklar;
gebelik.

Bu nedenle, analizin sonucu ek araştırmalarla netleştirilmelidir.

HIV için immünoblotlama yaparken (reaktif), kişi HIV ile enfekte kabul edilirse, bu onun sağlıklı olduğu anlamına gelir.

Virüsün hücreleri, reçete edilen ilaçlara zamanla adapte olur. Kontrol etmek için ELISA testi periyodik olarak tekrarlanır.

Bazen Western lekesi yanlış bir negatif sonuç gösterecektir. 6 ay (veya daha uzun) bir immün yetmezlik virüsü için son derece nadirdir. Bu, az sayıda virüs hücresinin kan dolaşımına girmesi durumunda mümkündür. Toplam vaka sayısının% 0,5'inde enfeksiyonu ancak bir yıl sonra teşhis etmek mümkündür. % 99.5'te, enfeksiyondan sonraki altı ay içinde, ELISA sırasında güvenilir bir sonuç elde edilecektir.

Son derece doğru çalışmalarla bile% 2 hata oranı var. İnsan faktörünü unutmamalıyız. Hata olasılığını ortadan kaldırmak için test 2 farklı kurumda yapılabilir.