Принципы диагностики вич инфекции. Современные методы диагностики вич-инфекции. Лабораторные методы диагностики: какие анализы выявляют ВИЧ

Диагностика ВИЧ инфекции необходима для назначения эффективного лечения. Чтобы диагностировать СПИД, проводится стандартная процедура обследования пациента. Она состоит из 2 этапов:

• сдача скрининга;
• иммунный блоттинг.

Для постановки диагноза дополнительно назначают ПЦР, экспресс-тестирование.

Проведение ИФА

Начальная диагностика СПИДа основана на применении лабораторных белков ВИЧ, которые улавливают специфические антитела. После их контакта с ферментами тест-системы изменяется цвет индикатора. Затем измененная цветовая гамма обрабатывается с помощью специальной аппаратуры, которая определяет результат тестирования.

Подобная лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции показывает результат через 21 день после инфицирования. С помощью ИФА нельзя определить наличие вируса. Данный метод диагностики способствует выявлению выработки антител к вирусу. Подобный процесс может наблюдаться через 2-6 недель после заражения.

Специалисты различают 4 поколения ИФА-систем с разной чувствительностью. Медики чаще применяют тесты 3 и 4 поколения. Эти системы созданы на основе рекомбинантных белков либо пептидов синтетического происхождения, которые обладают значительной точностью и специфичностью. ИФА применяется для выявления, мониторинга распространения вируса, что обеспечивает безопасность при проверке донорской крови. Точность таких систем колеблется в пределах 93-99%. Большей чувствительностью обладают тесты, выпущенные в Западной Европе. Чтобы выполнить диагностику, лаборант производит забор венозной крови (5 мл). За 8 часов перед исследованием рекомендуется отказаться от принятия пищи. Исследование чаще проводится утром.

Расшифровка данных

Для получения результатов теста потребуется 10 дней. Если результат отрицательный, то пациент не инфицирован. В таком случае лечение не назначается. Ложноотрицательный результат выявляется:

• до 3 недель после инфицирования;
• на последней стадии СПИДа при низкой иммунной системе;
• при неправильной подготовке крови.

Если результат положительный, тогда пациент инфицирован. В таком случае проводят ИБ. Ложноположительный результат указывает на наличие сопутствующих заболеваний и неправильно проведенную подготовку крови. Если тестирование показано беременным, то в собранном материале врач может выявить неспецифические антитела, выработка которых не связана с вирусом. Собранный материал исследуется в референсе либо арбитражной лаборатории. Если результат повторного тестирования отрицательный, тогда первый результат – ошибочный. В таком случае ИБ не проводится.

Проведение иммунного блоттинга

Лечение СПИДа назначается при получении положительного результата иммунного блоттинга. Этот метод диагностики проводится с помощью нитроцеллюлозной полоски, на которую наносятся вирусные белки. Для ИБ используют венозную кровь, которая затем подвергается обработке. Белки, находящиеся в сыворотке, разделяются на группы с учетом их заряда и молекулярной массы. Для проведения такого процесса используется специальная аппаратура.

При наличии в исследуемом материале антител к вирусу, на полоске проявляются соответствующие линии. Положительное ИБ указывает на ВИЧ-инфицирование пациента. Сомнительный результат выявляется на начальных этапах заражения, при туберкулезе и онкологии, у беременных. В таких случаях рекомендуется повторное проведение ИБ.

Неопределенный результат ИБ указывает на наличие в иммуноблоте одного и более белков к вирусу. Подобная картина наблюдается при недавнем заражении, когда в крови находится незначительное количество антител к инфекции. В таком случае ИБ будет положительным через некоторое время. Неопределенный результат данного исследования может быть связан с отсутствием ВИЧ-инфекции при гепатитах, хронических обменных заболеваниях, в период беременности. В таком случае ИБ станет отрицательным или специалисты выявят у пациента причину неопределенного результата.

ПЦР исследование

Защитная система поражается на фоне внедрения вируса в человеческий организм. Для инкубационного периода характерен срок в 3 месяца. Поэтому после полового контакта с ВИЧ-инфицированным партнером рекомендуется пройти ПЦР-диагностику. Она позволит определить РНК вируса. Период, в течение которого рекомендуется пройти подобное исследование, составляет 8-24 месяца.

Для окончательного диагноза показана регулярная сдача крови на ВИЧ (1 раз в 3 месяца). За счет высокой чувствительности данное обследование позволяет выявить вирус через 10 дней после инфицирования. Ложноположительный результат при ПЦР можно получить и при наличии в организме пациента другой инфекции. ПЦР исследование считается дорогостоящей процедурой, так как требует наличия специального оборудования.

ПЦР назначается для выявления вируса у следующих лиц:

• новорожденный, родившийся от ВИЧ-инфицированного матери;
• пациенты с сомнительным ИБ.

Также данная методика показана для контроля концентрации вируса в крови и исследования донорской крови.

Быстрые методики исследования

К современным методам диагностики СПИДа специалисты относят экспресс-тесты. Для их расшифровки потребуется 10-15 мин. Иммунохроматографические тесты, основанные на капиллярном потоке, обеспечивают точные результаты. Такие системы тестирования представлены в виде специальных полосок, на которые наносится кровь либо слюна. При наличии вируса через 10 мин на тесте появляются 2 полоски:

• контрольная;
• цветная.

В данном случае результат тестирования носит положительный характер. На отрицательный результат указывает появление одной контрольной полоски. Для подтверждения полученного результата проводится ИБ. На основе общий данных врач ставит диагноз, назначает лечение.

Можно выявить вирус в домашних условиях. Для этого используют специальные экспресс-наборы. OraSure Technologies1 – система, разработанная в США. Если после тестирования выявлен положительный результат, пациенту рекомендуется пройти полное обследование в медицинском центре.

Обследование ребенка

Новорожденные детки, которые родились от инфицированных матерей, срочно подвергаются обследованию. С помощью серологических методик нельзя точно выявить вирус у деток в возрасте 5-18 месяцев. Но результат такого обследования важен при проведении ИБ.

Выявить инфицирование у деток можно с помощью ПЦР. ДНК вируса выявляет специалист у детей первого месяца жизни. Чтобы установить концентрацию РНК возбудителя, специалисты определяют провирус иммунодефицита. Для исследования врач использует цельную кровь либо ее высохшее пятно. Материал помещается в пробирку с консервантом ЭДТА (пропорция 1:20). Образец необходимо хранить при температуре не выше 8°С (на протяжении 2 суток). Не допускается замораживание материала.

Для получения образца сухой крови наносят цельную жидкость на специальную бумагу. Образец можно хранить при температуре ниже 8°С. Карточки используют в течение 8 месяцев. Новорожденного ребенка необходимо осмотреть, взяв материал на исследование, в течение следующих сроков:

• через 48 часов после рождения;
• в возрасте 2 месяцев после рождения;
• через 3-6 месяцев после рождения.

Если врач выявил ген провируса ВИЧ через несколько часов после появления младенца на свет, то произошло внутриутробное инфицирование малыша. Заразиться вирусом можно и во время родов либо при грудном вскармливании. Результаты, которые указывают на наличие ДНК вируса в 2 образцах, указывают на развитие СПИДа у ребенка. Диспансерное наблюдение не требуется, если результаты ПЦР отрицательные через 4 месяца после рождения малыша.

Если результат тестирования отрицательный, но симптоматика СПИДа присутствует, тогда рекомендуется проконсультироваться с врачом. Подобная клиника может быть спровоцирована другими заболеваниями. Единственным и 100%-ным методом диагностики вируса считается тестирование. Даже квалифицированные и опытные специалисты не могут определить вирус по проявляемой симптоматике.

Если через некоторое время результаты пациента отрицательные, то ВИЧ в организме отсутствует.

При этом не учитывается симптоматика. Но подобная клиническая картина может быть связана со СПИДофобией. В таком случае требуется помощь психолога. При необходимости ребенку или взрослому назначают соответствующее лечение.

и

Если выявить болезнь на ранней стадии и сразу приступить к ее лечению, то можно остановить передачу вируса от носителей к здоровым людям. Также раннее выявление актуально для предоставления социальной, психологической помощи и возможности диспансерного лечения. На сегодняшний день возможно излечение от данного недуга, но при условии, когда диагностика ВИЧ инфекции выявила раннюю стадию инфицирования. Это существенно продлевает жизнь больным, что есть для них немаловажно.

Есть ряд симптомов, которые должны вас насторожить и заставить отправиться на обследование:

• Частое, необъяснённое утомление;
• Потовыделение в ночное время суток;
• Частые болевые ощущения в области головы;
• Лихорадочное состояние, примерно до десяти дней, с температурой до 38,5С;
• Диарейные проявления;
• Беспричинная потеря веса за короткий промежуток времени.

Если в период диагностики будут иметь место проявления сыпи, фурункулеза и других проявлений, это облегчит выявление болезни. Лимфаденопатия или увеличенные лимфатические узлы могут говорить о возможной инфекции, чаще всего это узлы шейные, челюстные, подключичные, подмышечные и локтевые. Размер их диаметром около 2,5 сантиметров. При пальпации болезненность не ощущается, они плотного эластичного содержания, редко проявляются как сливание в конгломерат. При ВИЧ узлы чаще всего увеличиваются группами, сроком более чем на три месяца.

Нередко при ранних фазах болезни встречаются психоневрологические симптомы:

• Тревожное поведение и ощущение;
• Депрессивное состояние;
• Неуверенная походка, шатание;
• Ухудшение четкости зрения, его снижение;
• Судороги;
• Нарушение памяти;
• Неадекватные действия и поступки, несвойственные человеку;
• Ослабление чувств;

Признаки начальной фазы ВИЧ, на которые следует обращать свое внимание:

• Сброс веса до 10%;
• Обнаружение изменений на слизистой оболочке (дерматиты, фурункулы, псориазы, грибок ногтей, язвы и гингивиты);
• Герпес у людей, возраст которых менее чем 50 лет;
• Рецидив инфекций респираторных путей.

Вторая фаза недуга развернута списком суперинфекций при иммунодефиците:

• Сброс веса более чем на 10%;
• Диарея, длящаяся более месяца;
• Кандидоз, поражающий полость рта;
• Туберкулезное поражение органов, лейкоплакия;
• Нейропатия, саркома Капоши, герпетические процессы;
• Бактериальные инфекции, проявляющиеся в тяжелой форме;

Последняя фаза диагностирования болезни может включать в себя:

• Пневмонию;
• Токсоплазмозы;
• CMV-инфекцию;
• Криптококкозы;
• Герпесные проявления;
• Лейкоэнцефалопатию с множеством очагов;
• Гистоплазмоз, эзофагит;
• МАК-инфекцию;
• Туберкулез и многие другие заболевания в более осложненной степени.

Лабораторные методы – это выявление СПИД-ассоциированных отклонений у пациента инфицированного второстепенным иммунодефицитом. Болезнь ВИЧ содержит 23 нозологических вида, уместен синдромальный подход к определению более точного диагноза.

Выявление ВИЧ основывается на установлении антител к ВИЧ и вирусных антигенов, а в некоторых случаях выявляется провирусная ДНК ВИЧ и вирусная РНК ВИЧ (у грудных детей до 1 года). база выступает в трех направлениях: определение ВИЧ и его составляющих, обнаружение анти-ВИЧ, установление перемен в функциональности иммунной системы. Составляющая ВИЧ – это структурные гены gag, pol, а также env, именно они кодируют белковую трансляцию на базе непосредственного строения вируса.

Регуляторные гены – это объединение tat, rev, vif, nyf, vpx и vpr. Ген gag шифрует сердцевинные белки с начальными продуктами трансляции, pр53 – предшествующий белок, который имеет свойство расщепляться на p15, p17 и p24 или р39, с последующим расщеплением на p17 и р24. У пациента возникают антитела к акразкэтому антигену, акр 24 можно выявить на начальных фазах инфицирования, так как р24 иммуногеннее, нежели р17.

1. Серологические методы обнаружения антител (АТ) к ВИЧ — стандарт при диагностике ВИЧ-инфекции (тест-системы ИФА на основе синтетических пептидов — обладают практически 100% чувствительностью и специфичностью). ИФА позволяет выявлять АГ ВИЧ, которые могут являться показателями раннего инфицирования или наоборот позднего — продвинутого развития ВИЧ-инфекции (р24 АГ)

2. Подтверждающие тесты — иммуноблотинг (ИБ), непрямая иммунофлюоресценция (НИФ) и радиоиммунопреципитация (РИП).

а) ВОЗ рекомендует считать положительной сыворотку, имеющую в ИБ антитела к двум оболочечным белкам и к одному из внутренних белков ВИЧ. Пациенты, положительные в ИФА, но имеющие неопределенные результаты в ИБ, должны быть обследованы клинически и оценены другими способами, медицинским обследованием, иммунологически и через 3 — 6 месяцев их сыворотку крови необходимо тестировать на антитела к ВИЧ.

б) метод непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) — применяют в качестве подтверждающего теста во многих лабораториях или как скрининговый тест.

в) радиоиммунопреципитация — высоко чувствительный и специфичный метод, основанный на использовании меченых радиоактивными изотопами аминокислот. Метод высоко чувствительный для обнаружения антител к поверхностным белкам и поэтому высокоспецифичен, поскольку эти компоненты вируса присутствуют практически у всех ВИЧ-инфицированных после сероконверсии.

3. Молекулярно-биологические методы : метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот, ПЦР

1) как альтернативный и дополнительный подтверждающий метод детекции наличия вируса в организме по отношению к серологическим методам лабораторной диагностики;

2) как первый метод специфического анализа при диагностике раннего ВИЧ-инфицирования, когда еще отсутствуют специфические противовирусные антитела;

3) для диагностики ВИЧ-инфицированности новорожденных от ВИЧ-инфицированных матерей;

4) для определения вирусной нагрузки и назначения специфической антиретровирусной терапии и контроля за её проведением;

5) как уточняющий метод при неясных серологических результатах и при несовпадении серологических и культуральных анализов;

6) при исследовании сексуальных партнеров ВИЧ-инфицированных лиц;

7) как метод дифференциальной диагностики ВИЧ-1 и ВИЧ-2;

4. Вирусологический метод .

1. Принципы антиретровирусной терапии: лечение должно начинаться до развития существенного иммунодефицита; начальная терапия должна включать комбинации не менее, чем из трех препаратов; модификация терапии должна заключаться в замене или подключении не менее двух новых препаратов; крайне важно измерять уровень СД4+ клеток и вирусную нагрузку; снижение вирусной нагрузки до уровня, лежащего ниже предела определения чувствительных методик, отражает оптимальный эффект лечения.

2. Выделяют три группы современных антиретровирусных препаратов:

а) нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (НИОТ): зидовудин (азидотимидин, ретровир); диданозин (ddI, видекс); зальцитабин (ddC, хивид); ставудин (зерит, d4Т); ламивудин (3ТС, эпивир); абакавир; адефовир; комбивир (зидовудин+ абакавир); тризивир (зидовудин+ламивудин+абакавир); адефовир(нуклеотидный ингибиторы обратной транскриптазы).

б) ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (ННИОТ): делавердин(рескриптор); невирапин(вирамун); ифавиренц.

в) ингибиторы протеазы (ИП): саквинавир; ритонавир (норвир); индинавир (криксиван); нельфинавир (вирасепт); ампренавир (агенераза); лопинавир (алувиран); калетра(лопинавир+ритонавир).

3. Монотерапия любым препаратом не может обеспечить достаточно выраженного и длительного подавления репликации ВИЧ. Более того, при монотерапии повышен риск появления резистентных штаммов и развития перекрестной устойчивости к препаратам той же группы. Единственным исключением является использование зидовудина в качестве монотерапии для снижения риска перинатальной передачи ВИЧ.

4. Наиболее важным критерием эффективности терапии является динамика вирусной нагрузки, которую следует определять: без лечения — каждые 6-12 мес, на фоне лечения — каждые 3-6 мес, а также через 4-8 недель после начала противовирусной терапии.

Помимо антиретровирусной терапии необходима терапия присоединившихся вторично заболеваний.

34.3 СПИД (клинические варианты, оппортунистические заболевания).

Опортунистические заболевания — тяжелые, прогрессирующие болезни, которые развиваются на фоне нарастающей иммуносупрессии и не встречаются у человека с нормально функционирующей иммунной системой (СПИД-индикаторные заболевания).

а) первая группа — это заболевания, которые присущи только тяжелому иммунодефициту (уровень СД4+ < 200 кл/мкл) и поэтому определяют клинический диагноз: 1. Кандидоз пищевода, трахеи, бронхов. 2. Внелегочный криптококкоз. 3. Криптоспоридиоз с диареей более 1 месяца. 4. Цитомегаловирусная инфекция с поражением различных органов, помимо печени, селезенки или лимфоузлов. 5. Инфекции, обусловленные вирусом простого герпеса, проявляющиеся язвами на коже и слизистых оболочках. 6. Саркома Капоши у лиц, моложе 60 лет. 7. Первичная лимфома мозга у лиц, моложе 60 лет. 8. Лимфоцитарная интерстициальная пневмония и/или легочная лимфоидная гиперплазия у детей в возрасте до 12 лет. 9. Диссеминированная инфекция, вызванная атипичными микобактериями с внелегочной локализацией. 10. Пневмоцистная пневмония. 11. Прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия. 12. Токсоплазмоз с поражением головного мозга, легких, глаз у больного старше 1 месяца.

б) вторая группа — заболевания, которые могут развиться как на фоне тяжелого иммунодефицита, так и в ряде случаев без него: 1. Бактериальные инфекции, сочетанные или рецидивирующие у детей до 13 лет (более двух случаев за 2 года наблюдения): септицемия, пневмония, менингит, поражения костей или суставов, абсцессы, обусловленные гемофильной палочкой, стрептококками. 2. Кокцидиомикоз диссеминированный (внелегочная локализация). 3. ВИЧ-энцефалопатия 4. Гистоплазмоз, диссеминированный с внелегочной локализацией. 5. Изоспороз с диареей, персистирующей более 1 месяца. 6. Саркома Капоши у людей любого возраста. 7. В-клеточные лимфомы (за исключением болезни Ходжкина) или лимфомы неизвестного иммунофенотипа. 8. Туберкулез внелегочный. 9. Сальмонеллезная септицемия рецидивирующая. 10. ВИЧ-дистрофия.

Наиболее часто встречаются пневмоцистная пневмония, криптококковый менингоэнцефалит, генерализованная цитомегаловирусная инфекция (энцефалит, ретинит, эзофагит, гепатит, колит), сепсис смешанной этиологии, генерализованная форма саркомы Капоши, туберкулез легких.

Все эти заболевания протекают с поражением одного или нескольких органов и систем: головного мозга, легких, печени, желудочно-кишечного тракта и носят тяжелый прогрессирующий характер. СПИД-индикаторные болезни появляются в различных сочетаниях, и даже адекватная терапия не приносит ожидаемого эффекта.

Клинические варианты СПИД : инфекто-, нейро-, онко-СПИД в зависимости от преобладания различной клиники.

ВИЧ: диагностика и лечение, профилактика

Синдром приобретенного иммунодефицита уже на протяжении более сорока лет является одной из ключевых проблем современного общества. Поэтому ВИЧ-диагностика сейчас привлекает много внимания и ресурсов. Ведь чем раньше будет обнаружен вирус, разрушающий иммунную систему организма, тем более высокими окажутся шансы избежать летального исхода.

Под аббревиатурой ВИЧ скрывается определение вируса иммунодефицита человека — одного из самых опасных среди ныне существующих. Под его воздействием происходит глубокое угнетение всех защитных свойств организма. Это, в свою очередь, приводит к возникновению различных злокачественных образований и вторичных инфекций.

Протекать ВИЧ-инфекция может по-разному. Иногда заболевание уничтожает человека за 3-4 года, в некоторых же случаях может длиться более 20 лет. Стоит знать о том, что данный вирус является нестойким и быстро гибнет, если находится вне организма носителя.

ВИЧ может передаваться искусственно, гемоконтактным путем и посредством биоконтактного механизма.

Если имел место единичный контакт с носителем вируса, то риск заражения будет низким, но при постоянном взаимодействии он значительно повышается. Диагностика ВИЧ-инфекции — это то, чем нельзя пренебрегать, особенно при смене полового партнера

Уделить внимание стоит и парентеральному пути заражения. Оно может произойти во время гемотрансфузий зараженной крови, инъекций с использованием игл, которые загрязнены кровью ВИЧ-инфицированных, а также при нестерильных медицинских манипуляциях (татуировки, пирсинг, стоматологические процедуры с использованием инструментов, не обработанных должным образом).

При этом стоит знать о том, что контактно-бытовой передачи вируса бояться не нужно. Но факт остается фактом: человек обладает высокой восприимчивостью к ВИЧ-инфекции. И если заражается субъект в возрасте за 35, то развитие СПИДа происходит ощутимо быстрее, чем у тех, кто еще не преодолел тридцатилетний рубеж.

Конечно, лучший способ идентифицировать проблему или ее отсутствие — это диагностика ВИЧ-инфекции. Но какие причины могут быть у человека, ведущего здоровый образ жизни, идти и проверять себя на факт заражения? Естественно, что подобная инициатива должна быть чем-то обоснована. Поэтому важно знать, какие симптомы могут свидетельствовать о разрушительных процессах, угнетающих иммунную систему.

Стадию инкубации вируса без анализа крови выявить вряд ли получится, поскольку организм в это время еще никак не реагирует на враждебные элементы.

Вторая стадия (первичные проявления) без помощи врача также может протекать незаметно. Но иногда происходит активная репликация вируса, и организм на это начинает реагировать — отмечается лихорадка, различные полиморфные высыпания, лиенальный синдром и фарингит. На второй стадии возможно присоединение таких вторичных заболеваний, как герпес, грибковые инфекции, пневмония и др.

Для третьей, латентной стадии, характерно постепенное нарастание иммунодефицита. Из-за того, что клетки защитной системы гибнут, динамика их производства повышается, и это позволяет компенсировать ощутимые потери. На данном этапе несколько лимфатических узлов, принадлежащих разным системам, могут воспалиться. Но сильные болезненные ощущения при этом не наблюдаются. В среднем латентный период длится от 6 до 7 лет, но может затянуться и на 20.

Во время стадии вторичных заболеваний, которая является четвертой, появляются сопутствующие инфекции грибкового, бактериального протозойного, вирусного генеза, а также злокачественные образования. Все это происходит на фоне выраженного иммунодефицита.

Методы диагностики ВИЧ-инфекции

Говоря о глубоком угнетении защитных механизмов организма вследствие воздействия вируса, стоит отметить, что будущее пациента в этом случае напрямую зависит от своевременной и точной диагностики.

Для этого в современной медицине используются различные тест-системы, в основе которых лежит иммунохемилюминесцентный, а также иммуноферментный анализ крови. Эти методики позволяют определить наличие антител, принадлежащих различным классам. Такой результат помогает ощутимо увеличить информативность методов аналитической, клинической специфичности и чувствительности при работе с инфекционными заболеваниями.

Интересным также является тот факт, что именно метод полимеразной цепной реакции позволил вывести диагностику ВИЧ на принципиально новый уровень. В качестве материала для исследования подходят самые разные биологические материалы: плазма крови, биоптат, соскоб, сыворотка, спинномозговая или плевральная жидкость.

Если говорить о методах лабораторных исследований, они прежде всего ориентированы на выявление нескольких ключевых заболеваний. Речь идет о ВИЧ-инфекции, туберкулезе, всех инфекциях, которые передаются половым путем, и вирусных гепатитах.

Для идентификации вируса иммунодефицита используются также молекулярно-генетические и серологические тесты. В первом случае определяется РНК вируса и ДНК провируса, во втором случае проводится анализ антител к ВИЧ и выявляется антиген Р24.

В клиниках, применяющих, так сказать, классические способы диагностики, используется преимущественно стандартный протокол серологического тестирования.

Ранняя диагностика ВИЧ

Этот вид определения факта заражения необходим для того, чтобы выявить угрозу поражения иммунной системы как можно раньше. Это, во-первых, позволяет избежать распространения инфекции, во-вторых, повлиять на заболевание в начальной стадии.

Если рассматривать пример России, то в армии и на флоте РФ была введена клиническая классификация ВИЧ-инфекции. Это дало свои положительные результаты: процесс ранней клинической диагностики стал значительно легче.

В качестве распространенных симптомов, свидетельствующих о возможном поражении иммунной системы, можно определить головную боль, ночную потливость и немотивированную утомляемость. Возможно также развитие лихорадки, сопровождающейся признаками тонзиллита. Это означает, что повышается температура до 38 градусов и выше, и при этом увеличиваются небные миндалины, а также появляются боли во время глотания. Все это дополняется быстрой потерей веса. При этом данные симптомы часто имеют комплексный характер.

В некоторых случаях ВИЧ-инфекция на ранних стадиях может проявляться в виде различных изменений состояния кожи. Речь идет о пятнах, розеолах, гнойничках, фурункулезах и др. Ранняя ВИЧ-диагностика также включает работу с такими симптомами, как генерализованное или ограниченное увеличение периферических лимфатических узлов.

Если наблюдается одновременный рост нескольких лимфоузлов, длящийся на протяжении трех месяцев и более, причем в разных группах, за исключением паховой области, то есть все основания подозревать вирус иммунной системы человека.

Говоря о диагностике в более поздний период, нужно обратить внимание на проявление вторичного иммунодефицита, который часто протекает под видом разных клинических симптомов. Речь идет о следующих проявлениях:

• немотивированная генерализованная периферическая лимфаденопатия;
• артралгия невыясненной этиологии, которая имеет волнообразное течение;
• ОРВИ (ОРЗ), воспалительные поражения легких и дыхательных путей, которые дают о себе знать достаточно часто;
• лихорадки неясного генеза и длительный субфебрилитет;
• общая интоксикация, которая проявляется посредством немотивированной слабости, быстрой утомляемости, вялости и др.

ВИЧ-диагностика на позднем этапе включает обследование при таком заболевании, как саркома Капоши, проявляющаяся появлением множественных новообразований часто в верхней части тела у молодых людей с последующим динамичным развитием и метастазированием.

Полимеразная цепная реакция

Рассматривая различные методы диагностики ВИЧ-инфекции, этому стоит уделить отдельное внимание. Сразу же следует отметить, что данный анализ крови может быть направлен на количественную и качественную характеристику.

В качестве цели подобного способа выявления вируса можно определить следующие задачи:

• проведение ранней диагностики инфицирования ВИЧ;
• внесение ясности при наличии сомнительных результатов в итоге иммуноблоттингового исследования;
• идентификация конкретной стадии болезни;
• контроль эффективности лечения, направленного на подавление вируса.

Если говорить о первичном инфицировании, то нужно отметить, что подобная методика позволяет определить РНК ВИЧ в крови пациента после 14 дней с момента заражения. Это очень хороший результат. При этом сам итог исследования будет иметь качественное выражение: либо положительный (вирус присутствует), либо отрицательный.

Количественное выражение ПЦР

Этот тип полимеразной цепной реакции используется для того, чтобы определить возможную скорость развития СПИДа и составить прогноз длительности жизни пациента.

Количественное определение клеток РНК ВИЧ в крови дает возможность понять, когда болезнь перейдет в клиническую стадию.

Стоит обратить внимание на тот факт, что методы лабораторной диагностики ВИЧ дают более точный результат, если нужный для анализов биоматериал определяется правильно, а его забор производится грамотно.

Для того чтобы осуществлять качественный мониторинг инфицированных, необходимо (при наличии такой возможности) использовать комплексный подход к исследованию иммунного статуса пациента. Речь идет о количественном и функциональном определении всех звеньев защитной системы: клеточный, гуморальный иммунитет и неспецифичная резистентность как таковая.

Лабораторная диагностика

Все чаще в современных лабораторных условиях используется многоэтапный метод оценки состояния иммунной системы. Такая методика нередко подразумевает определение субпопуляции иммуноглобулинов, лимфоцитов в крови. Это означает, что в учет берется соотношение клеток CD4/CD8. Если результат показывает менее 1,0, то есть основание подозревать иммунодефицит.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции должна включать этот тест в обязательном порядке, поскольку для данного вируса характерно избирательное поражение CD4-лимфоцитов, что и приводит к заметному нарушению упомянутого выше соотношения (менее 1,0).

Для оценки иммунологического статуса медики могут проводить тест на предмет наличия «грубых» или общих дефектов в системе гуморального и клеточного звена иммунитета. Речь идет о гипогаммаглобулинемии или гипергаммаглобулинемии в терминальной стадии, а также снижении продукции цитокинов, повышении концентрации циркулирующих иммунных комплексов, ослаблении ответа со стороны лимфоцитов на митогены и антигены.

Стоит обратить внимание и на тот факт, что лабораторная диагностика ВИЧ имеет два ключевых этапа:

1. Скрининговая лаборатория. Если был получен положительный результат в ИФА (иммуноферментный анализ), то его повторяют еще два раза в той же системе и без изменения сыворотки. В том случае, когда два из трех обследований привели к обнаружению влияния вируса, сыворотку отправляют для дальнейшего исследования в референс-лабораторию.
2. Второй этап, который включают в себя методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции, — это определение состояния иммунной системы. Проводится оно в упомянутой выше референс-лаборатории. Здесь положительная сыворотка снова исследуется в ИФА, но уже с использованием другой тест-системы, которая отличается от прежней составом антигенов, антител или форматом самих тестов. При определении отрицательного результата проводится повторное исследование в третьей тест-системе. Если воздействие вируса в итоге так и не было обнаружено, то фиксируется отсутствие ВИЧ-инфекции. А вот при положительном итоге сыворотка исследуется в линейном или иммунном блоте.

В конечном счете такой алгоритм приводит к получению положительных, нейтральных или отрицательных результатов.

Каждый гражданин должен знать о том, что ему доступна диагностика ВИЧ. СПИД могут идентифицировать в учреждениях частной, муниципальной или государственной системы здравоохранения.

Естественно, идентификация вируса была бы мало полезна при отсутствии различных методов воздействия на инфекцию. И хотя на данный момент еще нет вакцины, которая могла бы полностью нейтрализовать вирус, грамотная диагностика, лечение ВИЧ и последующая профилактика способны ощутимо улучшить состояние больного, продлив тем самым ему жизнь. Этот тезис подтверждает тот факт, что средняя продолжительность жизни мужчин, которые начали своевременное лечение ВИЧ, составляет 38 лет. Женщины, начавшие борьбу с вирусом иммунодефицита, живут в среднем 41 год.

После того как была проведена диагностика, лечение ВИЧ сводится к применению нескольких методик. В качестве одной из наиболее распространенных можно определить активную антиретровирусную терапию, она же ВААРТ. Если вовремя и грамотно применить этот вид лечения, то можно значительно замедлить развитие СПИДа или вовсе остановить его.

Суть ВААРТ сводится к тому, что одновременно используется несколько фармпрепаратов, целью которых является воздействие на различные механизмы развития вируса иммунодефицита.

После того как разные методы диагностики ВИЧ определили факт заражения, могут использоваться лекарства, которые оказывают следующие виды воздействия:

Иммунологическое. Стабилизируется иммунная система, поднимается уровень Т-лимфоцитов, а также восстанавливается защита от различных инфекций.

Клиническое. Предупреждается развитие СПИДа и любых его проявлений, продлевается срок жизни пациентов с сохранением всех функций тела.

Вирусологическое. Происходит блокировка размножения вируса, вследствие чего уменьшается вирусная нагрузка и впоследствии фиксируется на низком уровне.

Трудно переоценить важность таких мер воздействия на болезнь, как диагностика, лечение, профилактика ВИЧ-инфекции. Поэтому самое лучшее, что можно сделать после положительного итога исследования на предмет заражения, — это сразу начать бороться с болезнью. В качестве еще одного метода, который поможет это сделать, можно определить вирусологическое лечение.

В этом случае речь идет об использовании препаратов, которые не позволяют вирусу прикрепиться к Т-лимфоциту и попасть внутрь организма. Называются такие препараты ингибиторами проникновения. В качестве конкретного примера можно привести «Целзентри».

Для подавления ВИЧ могут использоваться ингибиторы вирусной протеазы. Целью этой группы лекарств является предотвращение заражения новых лимфоцитов. Это такие препараты, как «Вирасепт», «Реатаз», «Калетра» и др.

Третья группа актуальных лекарств — это ингибиторы обратной транскриптазы. Они нужны для блокировки фермента, позволяющего размножаться РНК вируса в ядре лимфоцита. Подобные методы позволяют ощутимо повлиять на такую проблему, как ВИЧ-инфекция. Диагностика, лечение и профилактика СПИДа — это дело квалифицированных врачей, поэтому алгоритм использования препаратов, должны составлять именно они.

При необходимости может использоваться также иммунологическое и клиническое воздействие.

Всемирная организация здравоохранения предлагает следующие методы борьбы с ВИЧ-инфекцией:

Профилактика заражения половым путем. Это защищенный секс, распространение презервативов, лечение ЗППП и обучающие программы.

Для беременных женщин, у которых была выявлена ВИЧ-инфекция, — диагностика, профилактика с использованием соответствующих химических препаратов, а также профессиональное консультирование и лечение.

Организация профилактики через препараты крови. В этом случае речь идет об антивирусной обработке и проверке доноров.

Социальная и медицинская помощь больным, а также их семьям.

Для того чтобы ВИЧ-диагностика не выявила наличие вируса, нужно следовать простым правилам безопасности:

если кровь инфицированного попала на кожу, ее нужно сразу же смыть водой с мылом, после чего обработать место контакта спиртом;

если было получено повреждение предметом с элементами вируса, то ранку нужно сжать, выдавить кровь, обработать это место перекисью водорода, а края прижечь йодом;

никогда не пользоваться шприцами, стерильность которых была нарушена;

при половых контактах использовать презерватив, а лучше изначально проверить партнера на предмет заражения.

Благодаря тому факту, что ВИЧ-диагностика не стоит на месте, тысячи людей получают возможность вовремя начать лечение и значительно увеличить продолжительность жизни. Главное, не игнорировать очевидные симптомы и не бояться идти к врачу.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции

Обследованию на ВИЧ-инфекцию подлежат:

2. Лица с подозрением или подтвержденным диагнозом: бактериальной инфекции у детей младше 13 лет, множественной и рецидивирующей; кандидоза пищевода, трахеи, бронхов или легких; цервикального инвазивного рака; диссеминированного или внелегочного кокцидиомикоза; криптококкоза внелегочного; криптоспоридиоза с диареей в течение 1 мес и более; цитомегаловирусного поражения других органов, кроме печени, селезенки, лимфатических узлов у больных старше 1 мес; цитомегаловирусного ретинита с потерей зрения; герпетической инфекции, вызывающей многоочаговые язвы, которые не излечиваются на протяжении 1 мес, или бронхит, пневмонию, эзофагит; гистоплазмоза диссеминированного или внелегочного; изоспороза с диареей свыше 1 мес; туберкулеза распространенного или внелегочного; туберкулеза легких у взрослых или подростков старше 13 лет; туберкулеза внелегочного; другого заболевания, вызванного микобактериями, кроме М. tuberculosis диссеминированного или внелегочного; пневмонии, вызванной пневмоцистами; прогрессирующей многофокусной лейкоэнцефалопатии; сальмонеллезной (кроме Salmonella typhi) септицемии, рецидивирующей; токсоилаз-моза мозга у детей старше 1 мес; саркомы Капоши; лимфоидной интерстициальной пневмонии у детей младше 13 лет; лимфомы Беркитта; иммунобластной лимфомы; первичной лимфомы мозга; синдрома истощения, гепатита В, носительства HBsAg; инфекционного мононуклеоза; рецидивирующего опоясывающего герпеса у лиц старше 60 лет; болезней, передающихся половым путем.

В высокоспециализироваиной лаборатории проводятся:

а) определение циркулирующих в крови антител, антигенов и иммунных комплексов; культивирование вируса, выявление его геномного материала и ферментов;

б) оценка функций клеточного звена иммунной системы. Основная роль принадлежит методам серологической диагностики, направленным на определение антител, а также антигенов возбудителя в крови и других биологических жидкостях организма.

Тестирование на антитела к ВИЧ осуществляют с целью:

а) безопасности гемотрансфузий и трансплантаций;

б) эпиднадзора, тестирование в целях мониторинга превалентности ВИЧ-инфекции и изучения динамики ее распространенности в определенной популяции;

в) диагностики ВИЧ-инфекции, т. е. добровольное тестирование сыворотки крови практически здоровых людей или больных с различными клиническими признаками и симптомами, сходными с ВИЧ-инфекцией или СПИДом.

Система проведения лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции построена по трехэтапному принципу. Первый этап - скрининговый, предназначен для выполнения первичных исследований крови на наличие антител к белкам ВИЧ. Второй этап референтный - позволяет с помощью специальных методических приемов уточнить (подтвердить) первичный положительный результат, полученный на скрининговом этапе. Третий этан - экспертный, предназначен для окончательной проверки наличия и специфичности маркеров ВИЧ-инфекции, выявленных на предыдущих этапах лабораторной диагностики. Необходимость нескольких этапов лабораторной диагностики обусловлена прежде всего экономическими соображениями.

В практике применяется несколько тестов, позволяющих с достаточной степенью достоверности выявлять ВИЧ-инфицированных:

ИФА (ELISA)-тecт (твердофазный иммуноферментный анализ) выявления первого уровня, характеризуется большой чувствительностью, хотя и меньшей специфичностью перед нижеследующими;

Иммунный блот (Western-blot), весьма специфичный и наиболее используемый тест, позволяющий дифференцировать ВИЧ-1 и ВИЧ — 2;

Антигенемия р25-тест, эффективный в начальных стадиях заражения;

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

В случаях массового скрининга образцов крови рекомендуется тестировать смеси сывороток от группы обследуемых, составленные с таким расчетом, чтобы конечное разведение каждого образца не превышало 1:100. Если смесь сыворо-ток оказывается положительной, проводится исследование каждой сыворотки положительной смеси. Этот способ не ведет к потере чувствительности как в ИФА, так и в иммуноблоте, но снижает трудовые затраты и стоимость первичного обследования на 60-80%.

При первичной серодиагностике ВИЧ-инфекции проводится определение суммарных антител с помощью скрининговых отборочных тестов - ИФА и агглютинационных реакций. На втором (арбитражном) этапе используют более сложный тест - иммуноблот, позволяющий не только подтвердить или отклонить первоначальное заключение, но и сделать это на уровне определения антител к индивидуальным белкам вируса.

Иммуноферментный анализ (ИФА) является основным и наиболее широко применяемым методом определения антител к ВИЧ. Но к недостаткам применения ИФА в серодиагностике ВИЧ-инфекции следует отнести частые ложноположительные результаты. В связи с этим результат в ИФА не является основанием для заключения о ВИЧ-серопозитивности обследуемого. Это связано с недостаточной очисткой иммуносорбента от балластных белков; спонтанным связыванием антител сыворотки с пластиком, если его участки, не занятые иммуносорбентом, недостаточно блокированы или не блокированы совсем специальным нейтральным белком; перекрестным взаимодействием с ВИЧ-белками иммуносорбента различных протеинов, присутствующих в крови лиц с определенными, чаще аутоиммунными патологическими процессами типа рассеянного склероза, СКВ, туберкулеза; с частым донорством, инфекционными и онкозаболеваниями, ожогами, беременностью, повторными гемотрансфузиями, пересадкой органов, тканей, а также лиц, находящихся на гемодиализе; с присутствием в крови ревматоидного фактора, часто провоцирующего ВИЧ-ложноположительные реакции; наличием в крови обследуемых людей антител к gag-белкам ВИЧ и прежде всего к белку р24 (очевидно, образуются антитела к экзо-или эндогенным не идентифицированным еще ретровирусам). Так как анти-р24 синтезируются в обязательном порядке на ранних стадиях ВИЧ-сероконверсии, проводится дальнейшее иммунологическое наблюдение за лицами с антителами к gag-белкам ВИЧ, а также отстранение их от донорства.

Чувствительность и специфичность иммуноферментно-го анализа постоянно повышаются. В результате ИФА четвертого поколения не уступают по своим диагностическим возможностям иммунному блотингу и могут быть использованы не только на скрининговом, но и на подтверждающем этапе диагностики ВИЧ-инфекции [Смольская Т. Т., 1997].

Иммуноблотинг является конечным методом серологической диагностики, позволяющим сделать окончательное заключение о ВИЧ-позитивности или негативности обследуемого.

Существует четкая корреляция между результатами исследования сывороток в иммуноблоте и ИФА - дважды положительные в ИФА с разными тест-системами сыворотки в 97-98% случаев оказываются затем ВИЧ-позитивными в иммуноблотинге. Если же сыворотки оказались положительными в ИФА лишь в одной из двух использованных тест-систем, в иммуноблоте они выявляются положительными лишь в 4% случаев. В 5% случаев при проведении подтверждающих исследований у лиц с положительными данными ИФА-иммуноблот может давать «неопределенные» результаты, а среди них примерно в 20% случаев «неопределенные» результаты вызывают антитела к gag-белкам ВИЧ-1 (р55, р25, р18). Наличие антител только к gag-белкам ВИЧ-1 является поводом для дополнительного обследования сыворотки крови на инфицирование ВИЧ-2.

Оценка результатов иммуноблотинга осуществляется строго в соответствии с прилагаемой к тест-системе инструкцией. В случае отсутствия в инструкции указаний по интерпретации результатов следует использовать критерии ВОЗ.

При получении положительных результатов исследований на референтном этапе лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции и отрицательном результате исследования методом иммунного блотинга проводится обязательная повторная экспертная диагностика через 6 мес после первого обследования.

Если результаты иммуноблотинга через 12 мес после исследования первой пробы остаются отрицательными или неопределенными, то при отсутствии факторов риска, клинических симптомов или других факторов, связанных с ВИЧ-инфицированием, обследуемого снимают с диспансерного наблюдения.

Среди серологических методов в случае неопределенных результатов иммуноблота используется в качестве экспертной диагностики радиоиммунопреципитация (РИП). В основе ее лежит использование белков вируса, меченных радиоактивным йодом, а преципитаты выявляются с помощью бета-счетчиков. К недостаткам метода относится дороговизна аппаратуры, необходимость оборудования для этих целей специальных помещений.

Лица, у которых диагностирована ВИЧ-инфекция, подлежат постоянному динамическому наблюдению с обязательным лабораторным обследованием каждые 6 мес.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) выявляет предварительно умноженные нуклеотидные последовательнос-ти, специфичные для генома данного возбудителя. Изолированное умножение гена или его фрагмента, называемое амплификацией, ПЦР дает возможность осуществлять в пробирке при помощи фермента термостабильной ДНК-полимеразы. За 2-3 часа ПЦР позволяет получить миллионы копий специфического участка вируса. При ВИЧ-инфекции из клеточной РНК, включающей и РНК вируса, если он репродуцировался в клетке или был интегрирован в ее геном, с помощью обратной транскрипции и гибридизации с мечеными олигонуклеотидными «зондами» получают достаточное для анализа количество провирусной ДНК, которую выявляют и характеризуют количественно, как и в отношении принадлежности к геному ВИЧ, по радиоактивной или иной метке зонда устанавливая гомологию ДНК и специфических для вируса аминокислотных последовательностей. Чувствительность ПЦР - обнаружение вирусных генов в одной из пяти тысяч клеток.

ПЦР, в том числе количественная, может быть исполь-зовна только в целях определения вирусной нагрузки на плазму для решения вопроса начала медикаментозного лечения больного или смены антиретровирусных лекарственных препаратов. ПЦР не может быть рекомендована для постановки диагноза ВИЧ-инфекции, так как даже самые ультрасовременные методы ее постановки и реактивы позволяют определить вирусную нагрузку не ниже определенного уровня - 50 копий/мл. А сложность постановки ПЦР и ее дороговизна (около 200 долларов) сводят на нет ее широкомасштабное использование как метода повседневной лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. Таким образом, ПЦР остается незаменимой только для оценки вирусной нагрузки на плазму у больных с уже установленным диагнозом ВИЧ-инфекции в целях решения вопроса терапии больных.

Схематично этапы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции представлены на рис. 1.

Рис. 1. Этапы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

В течение ВИЧ-инфекции существует период «темного лабораторного окна», когда количество антител против ВИЧ является недостаточным для чувствительности тест-систем. Период этот колеблется от одной недели до трех месяцев от момента заражения ВИЧ в зависимости от уровня чувствительности тест-системы. С учетом этого явления возникают сложности при обследовании донорской крови от лиц, пребывающих в упомянутом периоде ВИЧ-инфицирования. Поэтому в большинстве стран мира введена система использования крови только после ее хранения на протяжении 3-6 мес с целью осуществления обязательного повторного обследования на ВИЧ-инфекцию доноров данных доз крови и ее компонентов.

Стадия первичных проявлений характеризуется активностью репликативного процесса. Возникающие виремия и антигенемия вызывают образование специфических антител класса IgM: анти-р24, aнти-gp41, aнти-gp120. Антиген р24 у части инфицированных может быть выявлен в крови методом ИФА уже через 2 нед после заражения и определяться до 8-н недели. Далее в клиническом течении ВИЧ-инфекции отмечается второй подъем содержания в крови белка р24, он приходится на период формирования стадии СПИД.

Появление полной сероконверсии, когда в периферической крови регистрируется высокий уровень специфических антител класса IgG к структурным белкам ВИЧ gp41, р24, gpl20, существенно облегчает диагностику ВИЧ-инфекции. Большинство коммерческих наборов рассчитано на индикацию именно таких антител.

Трудности с выявлением антител у больных ВИЧ-инфекцией могут возникнуть в периоды массивной виремии и антигенемии, когда имеющиеся специфические антитела в крови израсходованы на связывание вирусных частиц, и репликативный процесс опережает наработку новых противовирусных антител.

У лиц с исходно ослабленной иммунной системой виремия и антигенемия появляются раньше и сохраняются на высоком уровне до исхода заболевания. Вместе с тем у таких больных отмечается низкое содержание свободных антител к ВИЧ, обусловленное двумя причинами - недостаточной продукцией антител В-лимфоцитами и связыванием антителами вирионов и растворимых белков ВИЧ, поэтому для определения инфицированности требуются тест-системы с повышенной чувствительностью или модификации методов анализа, предусматривающие этап высвобождения антител из иммунных комплексов.

Несмотря на обилие специфических маркеров ВИЧ-инфекции, наиболее часто определяемым является наличие суммарных антител к белкам ВИЧ. Термин «суммарный» подразумевает присутствие двух классов антител (IgG и IgM) и широкий спектр антител к различным, в первую очередь к структурным, белкам ВИЧ.

Определение СD4-клеток. Основным клинико-лабораторным показателем диагностики стадии ВИЧ-инфекции, степени разрушения иммунной системы у больных в повседневной жизни стало определение содержания CD4+-лимфоцитов: уменьшение уровня ниже 200 клеток/мм3 является основным критерием постановки диагноза СПИД. Считается, что все ВИЧ-инфицированные лица с количеством CD4+-лимфоцитов 200 клеток/мм3 и ниже нуждаются как в противовирусной терапии, так и профилактике пневмоцистной пневмонии. И хотя у 1/3 ВИЧ-инфицированных с количеством С04+-лимфоцитов менее 200 клеток/мм3 отсутствуют клинические проявления, опыт показал, что у них симптомы развиваются в ближайшие 2 мес, поэтому они все расцениваются как больные на стадии СПИДа.

Диагностика ВИЧ-инфекции

Как узнать, есть ли у человека ВИЧ? Самый распространенный метод диагностики ВИЧ-инфекции — иммуноферментный анализ (ИФА). Иммуноферментные тест-системы используются для выявления в сыворотке крови антител к ВИЧ.

ВИЧ-инфекция подтверждается двумя разными тестами — скрининговым тестом и подтверждающим тестом. Из-за высокой чувствительности скрининговые тесты могут давать ложноположительные результаты. Поэтому, обычно при получении первичного положительного результата берется тот же образец крови и скрининговый тест дублируется второй раз, и если он опять положительный, только тогда проводится подтверждающий тест другого типа. Подтверждающие тесты проводятся только для образцов крови, которые неоднократно дают положительные результаты (являются «реактивными»).

Наиболее распространенный скрининговый тест — иммуноферментный анализ (ИФА). Обычно для него используют в качестве подтверждающего теста иммунный блотинг. Комбинация из двух разных типов тестов гарантирует, что полученные результаты обладают «высокой точностью».

Скрининговые тест-системы используют искусственно созданные белки ВИЧ, которые «ловят» специфические антитела, выработанные организмом в ответ на белки вируса. Как только антитела пойманы, они «могут быть определены реагентами, которые применяются вместе с индикатором, например, ферментом, который приводит к изменению цвета». Изменения цвета считываются машиной, которая и определяет результат. Иммунный блотинг действует по похожей схеме, но для него используется электрическое поле, которое различает различные компоненты на основе их молекулярной массы. Это позволяет определить антитела к специфическим вирусным антигенам, которые затем изображаются на бумаге как различимые «полоски». Современные тест-системы могут определить ВИЧ-инфекцию через 3-5 недель у большинства людей.

Если был риск заражения ВИЧ, когда можно сделать тест?

Иммуноферментный анализ (ИФА), который используется для диагностики ВИЧ, может показать результат только через несколько недель после инфицирования. Этот тип анализа определяет не сам вирус, а антитела к нему. У некоторых людей антитела присутствуют в крови в достаточном количестве уже через 2 недели. Тем не менее, у большинства людей образование антител (сероконверсия) занимает больше времени. Чтобы результат теста был достаточно достоверен, необходимо, чтобы прошло около 3 месяцев после рискованной ситуации. Иногда образование антител занимает больше времени — от 3 до 6 месяцев.

Если результат теста отрицательный через 3 месяца, обязательно ли делать повторный тест через 6 месяцев?

У подавляющего большинства людей тест вполне достоверен через 3 месяца (у большинства антитела появляются еще раньше). Можно полностью исключить возможность заражения, сдав анализ через 6 месяцев.

Как долго нужно ждать результатов теста?

Это зависит от особенностей лаборатории, в которой проводиться тестирование. Тест ИФА можно сделать в течение этого же дня, но в большинстве лабораторий этот срок может составлять от 1-2 дней до 2 недель. Учитывая, что ожидание результатов может быть весьма неприятным периодом, лучше всего уточнить этот вопрос заранее, до сдачи анализа. Также можно узнать, не повлияют ли на сроки теста выходные дни и праздничные дни.

Насколько достоверен положительный результат теста?

Иногда у ИФА бывают ложноположительные результаты (примерно в 1% случаев), причиной подобного результата может быть беременность, различные вирусные инфекции, а также простая случайность. После получения положительного результата необходим более точный тест — иммуноблот, по результатам которого и ставится диагноз. Положительный результат иммуноблота после положительного ИФА достоверен на 99,9% — это максимальная точность для любого медицинского теста. Если иммуноблот отрицательный, значит, первый тест был ложноположительным, и на самом деле ВИЧ у человека нет.

Что такое неопределенный (сомнительный) результат?

Если ИФА бывает положительным или отрицательным, то иммуноблот может быть положительным, отрицательным или неопределенным. Неопределенный результат иммуноблота, т.е. наличие в иммуноблоте хотя бы одного белка к вирусу, может наблюдаться, если заражение произошло недавно и в крови еще мало антител к ВИЧ, в этом случае иммуноблот станет положительным через некоторое время. Также неопределенный результат может появиться при отсутствии ВИЧ-инфекции при гепатите, некоторых хронических заболеваниях обменного характера, или при беременности. В этом случае, либо иммуноблот станет отрицательным, либо будет обнаружена причина неопределенного результата.

Нужно ли при поступлении на работу сдавать тест на ВИЧ?

По законодательству РФ обязательным освидетельствование на ВИЧ может быть только для доноров крови, иностранных граждан и лиц без гражданства, желающих въехать на территорию РФ сроком свыше трех месяцев, а так же медицинский персонал, работающий непосредственно с кровью; лица, находящиеся в местах лишения свободы. Все остальные граждане сдают тест на ВИЧ добровольно.

ВИЧ-инфекция – заболевание, возникающее в результате заражения вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).

ВИЧ-это РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству ретровирусов.

Общим свойством ретровирусов является наличие фермента – обратной транскриптазы (ревертазы), которая «снимает» с РНК генетически точную копию в виде ДНК. По морфологии, структуре генома и другим признакам ВИЧ относится к семейству лентивирусов, то есть вирусов медленных инфекций. К общим чертам заболеваний, вызываемым вирусами этого семейства, можно отнести: продолжительный, не имеющий точных сроков период инкубации (от 1 мес. до 10 и более лет); незаметное, бессимптомное начало заболевания; медленно нарастающую клиническую картину; опосредованность патогенеза через иммунную систему и высокую скорость генетической изменчивости вируса. Все это в значительной мере затрудняет диагностику, лечение и профилактику ВИЧ-инфекции.

В настоящее время известны две разновидности ВИЧ: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Заболевание, вызываемое ВИЧ-2, характеризуется замедленной динамикой и более длительным течением.

Эпидемиология и пути передачи:

ВИЧ-инфекция – антропоноз, единственный источник возбудителя для человека – вирусоноситель и больной СПИДом.

Вирусные частицы (вирионы) – присутствуют во всех биологических жидкостях организма, но в различных концентрациях. Наиболее высокое содержание вируса – в крови и семенной жидкости.

Передача вируса осуществляется тремя путями:

— от матери к плоду/новорожденному.

ВИЧ не передается при обычных бытовых контактах и воздушно-капельным путем. Не зарегистрированы и случаи передачи ВИЧ через укусы кровососущих насекомых.

Однако контагиозность ВИЧ не так высока, как у других ИППП. Так, из более чем 1600 обследованных половых партнеров ВИЧ-инфицированных только 15% заразились этим вирусом.

Развитие ВИЧ-инфекции определяется двумя взаимодействующими факторами: основным патогенным свойством ВИЧ – ослаблять иммунную систему инфицированного человека и специфическим иммунным ответом организма, развивающимся в процессе заболевания.

ВИЧ пантропен, но основными клетками-мишенями для него являются Т-хелперы, несущие на мембране сотни молекул рецептора CD4+. В организме вирус трансформируется от менее агрессивного состояния в более агрессивному, что выражается в прогрессивном уменьшении числа CD4+ лимфоцитов в крови вплоть до полного их исчезновения и приводит к утяжелению клинической картины.

От момента инфицирования до появления специфических противовирусных антител происходит, как правило, 6-8 недель. Период между инфицированием и появлением определяемых антител к ВИЧ в сыворотке крови называется периодом «окна».

С одной стороны, иммунная система является мишенью для вируса, с другой – сама вырабатывает специфические антитела к нему. При этом в иммунной системе происходит развитие аутоиммунных процессов, которые усугубляют процесс разрушения клеток и тканей организма.

ВИЧ-инфекция характеризуется отсутствием специфической клинической картины, и ее диагноз, как правило, ставится на основании тщательно собранного анамнеза в сочетании с рядом признаков, подтвержденных лабораторной диагностикой. В 1983 году ВОЗ разработала определенные критерии, по которым можно установить наличие ВИЧ-инфекции в случае недоступности серологической диагностики (критерии «Банги»). К ним относятся:

— потеря массы тела более, чем на 10% от исходной;

— хроническая диарея в течение более одного месяца;

— длительная лихорадка в течение одного месяца (постоянная или интермиттирующая).

— упорный кашель более одного месяца;

— генерализованный зудящий дерматит;

— herpes zoster в анамнезе;

— хроническая прогрессирующая или диссеминированная герпетическая инфекция (herpes simplex);

Диагноз ВИЧ-инфекции по этим критериям может быть поставлен больному, если у него обнаруживается одновременно по крайней мере два «больших» признака и один «малый». Достаточным основанием для постановки диагноза СПИД может служить обнаружение у больного генерализованной саркомы Капоши или криптококкового менингита. Из-за низкой чувствительности и специфичности данных критериев ВОЗ в дальнейшем потребовала серологического подтверждения диагноза.

Клиническая классификация ВИЧ-инфекции:

Стадия первичных проявлений:

А. острая лихорадочная фаза;

Б. бессимптомная фаза;

В. персистирующая генерализованная лимфаденопатия.

Стадия вторичных заболеваний:

А. Потеря веса менее 10 кг, поверхностные бактериальные, вирусные, грибковые поражения кожи и слизистых, опоясывающий лишай, повторные фарингиты, синуситы.

Б. Прогрессирующая потеря в весе более 10 кг, необъяснимая диарея, лихорадка более 1 месяца, волосатая лейкоплакия, туберкулез легких, повторные или стойкие бактериальные, грибковые, вирусные, протозойные поражения внутренних органов (без диссеминации) или глубокие поражения кожи и слизистых, повторный и диссеминированный опоясывающий лишай, локализованная саркома Капоши.

Наличие антител к ВИЧ в зависимости от стадии заболевания.

Антитела к ВИЧ в крови

Результат теста на ВИЧ

II. Первичные проявления

Б. Бессимптомная фаза

III. Вторичные заболевания

После попадания вируса в организм происходит его размножение в крови. У 50% инфицированных лиц в этот период может развиваться продромальное состояние, сопровождающееся подъемом температуры тела до 38,5-39,5 ° С и другими мононуклеозоподобными симптомами и сохраняющееся от трех до 10 дней. Такое состояние проходит, напоминая период восстановления после гриппозной инфекции.

Начиная с 6-8 недели заболевания, происходит увеличение уровня антител в крови, то есть сероконверсия. В этот период может развиваться генерализованная лимфаденопатия и незначительный иммунодефицит, но у части больных клинические проявления ВИЧ-инфекции минимальны. При выраженном синдроме приобретенного иммунодефицита человека (СПИД) происходит бурное развитие оппортунистических инфекций внутренних органов, поражается нервная система. На коже и слизистых наблюдается активизация сапрофитной флоры. Развивается саркома Капоши и другие опухоли. Могут активизироваться такие инфекции, как туберкулез, сифилис, глубокие микозы и др. Характерным заболеванием для ВИЧ-инфицированных является пневмоцистная пневмония. У части больных увеличивается печень и селезенка, что является неблагоприятным признаком, свидетельствующим о быстром прогрессировании процесса. Встречаются церебральные формы ВИЧ-инфекции – такие, как менингиты, вызванные дрожжевыми грибками, токсоплазматические абсцессы мозга, острые и подострые энцефалиты, изолированные опухоли мозга (лимфомы). У больных могут проявляться различные сосудистые поражения.

К методам неспецифической диагностики относятся следующие: определение содержания в крови субпопуляций Т-лимфоцитов, оценка активности реактивности Т-лимфоцитов периферической крови или биопсийного материала.

К специфическим методам диагностики относятся:

— обнаружение ДНК провируса или РНК вируса ВИЧ в клетках человека методом ПЦР;

— обнаружение зрелых инфекционных вирионов в биологических жидкостях и клетках;

— определение растворимых белков вируса (антигенов);

— определение антител к ВИЧ (ИФА, иммуноблот, реакция агглютинации, радиоиммунопреципитация).

Наиболее распространенный скрининговый метод диагностики – ИФА. Получение отрицательного результата может свидетельствовать:

— об отсутствии инфицированности;

— о проведении исследования до наступления сероконверсии (в период «окна» или в другие периоды исчезновения титра антител).

Положительные результаты бывают истинными и ложными. Ложноположительные могут быть получены при обследовании больных хроническими инфекционными, аутоиммунными или онкологическими заболеваниями, неинфицированных беременных женщин, пациентов после гемотрансфузий и больных хроническим алкоголизмом. Наиболее ранние сроки обнаружения антител к ВИЧ- 3-4 недели со дня заражения.

Подтверждающий анализ. Иммуноблот.

После проведения скринингового теста все положительные результаты проверяются в другой иммуноферментной системе, а затем – в более чувствительном тесте – иммуноблоте. Сыворотки, подтвержденные с помощью этого теста, можно считать истинно положительными.

Перед проведением исследования на ВИЧ, пациент обязательно должен быть проконсультирован (дотестовое консультирование) на предмет причин, по которым необходимо провести анализ, а после получения результата, соответственно, необходимо провести послетестовое консультирование с целью разъяснения результата исследования. На всех этапах диагностики и последующего лечения необходимо соблюдать конфеденциальность.

Известны четыре основных подхода к лечению ВИЧ-инфекции: этиологический, иммуностимулирующий, иммунозаместительный и патогенетический (против вторичных инфекций).

Способностью подавлять обратную транскриптазу вируса обладают аналоги нуклеотидов или ингибиторы других классов. Первым препаратов для лечения больных СПИДом был аналог нуклеотидов – азидотимидин. Препарат вызывает побочные действия, влияя прежде всего на гемопоэз, и у большинства больных при длительном приеме (более 6 мес.) формируется устойчивость к нему. В настоящее время используют свыше 10 новых препаратов – ингибиторов протеаз и обратной транскриптазы. Значительно усложняет процесс создания эффективных препаратов стремительная скорость мутации ВИЧ в организме, сопровождающаяся появлением устойчивых к лечению штаммов.

Только комбинированный подход может ограничить размножение вируса и предотвратить развитие лекарственной устойчивости. Стала стандартом тройная антиретровирусная терапия (комбинация трех лекарственных препаратов, основанная на двух нуклеозидных аналогах и протеазоингибиторах).

Диагностика ВИЧ-инфекции включает в себя два этапа: установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией и определение стадии заболевания. За определением стадии неразрывно следует и выяснение характера течения заболевания, а затем и формирование прогноза у данного больного, а также выбор тактики лечения.

Как известно, диагностика любого инфекционного заболевания основана на сопоставлении эпидемиологических, клинических и лабораторных данных, и преувеличение значения одной из групп этих данных может привести к диагностическим ошибкам.

Эпидемиологические критерии ВИЧ-инфекции .

Первым этапом диагностики ВИЧ-инфекции является сбор эпидемиологического анамнеза и других эпидемиологических данных об обследуемом пациенте. Отсутствие эпидемиологических данных может существенно затруднить диагностику ВИЧ-инфекции и препятствовать проведению противоэпидемических мероприятий.

Эпидемиологические критерии иногда могут быть решающими в постановке диагноза ВИЧ-инфекции, но могут иметь и вспомогательное значение. Критерием высокой вероятности инфицирования является обнаружение у обследуемого лица таких факторов риска заражения, как переливание донорской крови, полученной от ВИЧ-инфицированного лица, рождение обследуемой женщиной ВИЧ-инфицированного ребенка. Велика вероятность инфицирования в случае рождения обследуемого от ВИЧ-инфицированной матери, полового контакта с ВИЧ-инфицированным лицом, совместного парентерального приема наркотиков с ВИЧ-инфицированным лицом. Определенный риск заражения обнаруживается при достоверных парентеральных вмешательствах, которые осуществляются инструментами, вероятно, контаминированными ВИЧ (то есть во внутрибольничных и подобных им очагах ВИЧ-инфекции с парентеральным путем передачи ВИЧ).

О заметном риске заражения речь может идти в тех случаях, когда обследуемый сообщает о половых связях или о парентеральном приеме наркотиков на территориях, где ВИЧ значительно распространен среди той группы населения, к которой принадлежит обследуемый.

В то же время половые связи и прием наркотиков на территориях с низким распространением ВИЧ-инфекции не исключает возможности заражения ВИЧ.

Отсутствие достоверных факторов риска заражения ВИЧ может ставить под сомнение данные лабораторных исследований. В таких случаях рекомендуется повторить лабораторные исследования.

Клинические критерии ВИЧ-инфекции.

Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции обеспечивает своевременность терапии больного и развертывание профилактических мероприятий в очаге, предупреждающих неумышленную передачу вируса от инфицированного здоровому человеку. Наконец, ранняя диагностика позволяет своевременное проведение диспансеризации, психологической помощи, социальной реабилитации. Первые успехи в терапии больных позволяют при ранней диагностике значительно продлить жизнь больным и даже надеяться на излечение.

Сложность ранней диагностики, базирующейся на клинической картине заключается в неспецифичности, полиморфности симптоматики в стадии II, уже не говоря об отсутствии клиники в стадии I. Тем не менее во всех случаях немотивированной утомляемости, наличия ночных потов, головной боли, особенно на фоне кратковременной лихорадки (3-10 дней) с температурой 38-38,50 С, сопровождающейся тонзиллитом, длительного диарейного синдрома, похудания за короткое время, необходимо в первую очередь исключить ВИЧ-инфекцию. Постановке диагноза в этот период помогает выявление при объективном обследовании разнообразной кожной сыпи (пятна, папулы, розеолы, гнойнички) или фурункулеза. Наличие лимфаденопатии, даже в случаях увеличения одной группы лимфатических узлов и тем более при генерализованной уже с большей долей вероятности позволяет заподозрить клинически ВИЧ-инфекцию. Для болезни особенно характерно увеличение заднешейных, подчелюстных, над- и подключичных, подмышечных и локтевых лимфатических узлов. Как правило, они увеличиваются размером до 2-5 см в диаметре, безболезненны, плотно-эластичной консистенции, изредка сливаются в конгломерат. Весьма характерно для ВИЧ-инфекции увеличение более чем одного узла, более чем одной группы (за исключением паховых), длящееся свыше 3 мес.

Нередко в ранней фазе болезни наличие психо-неврологической симптоматики: чувство тревоги, депрессия, шаткость походки, снижение остроты зрения, судорожные припадки с признаками поражения психо-эмоциональной сферы (нарушение памяти, забывчивость, неадекватность поведения, притупление эмоций). К наиболее характерным признакам ранней стадии ВИЧ-инфекции относятся:

1. Снижение массы тела менее, чем на 10%;

2. Изменения на коже и слизистых оболочек (себорйный дерматит, фолликулит, пруриго, псориаз, грибковые поражения ногтей, рецидивирующие язвы в полости рта, некротический гингивит);

3 . Опоясывающий герпес у лиц моложе 50 лет;

4. Рецидивирующие инфекции верхних дыхательных путей;

В промежуточной стадии болезни, характеризующейся клиникой развернутой суперинфекции, сформировавшейся в результате иммунодефицита наиболее характерны:

1 . Прогрессирующее снижение массы тела свыше 10%;

2 . Диарея неясного генеза, продолжающаяся свыше 1 мес..;

3 . Кандидоз полости рта;

4 . Лейкоплакия;

5. Туберкулез легких;

6. Периферическая нейропатия;

7. Локализованные формы саркомы Капоши;

8. Диссеминирующий опоясывающий герпес;

9. Тяжелая, рецидивирующая бактериальная инфекция (пневмония, синуситы, пиомиозит).

Для поздней стадии , позволяющей диагностировать ВИЧ-инфекцию, или, во всяком случае, проводить дифференциальную диагностику, относятся:

1. Пневмоцистная пневмония;

2 . Токсоплазмоз;

3. Криптококкоз;

4. CMV-инфекция;

5. Простой герпес;

6. Прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия;

7. Гистоплазмоз;

8. Кандидозный эзофагит;

9. МАК-инфекция;

10. Сальмонеллезная септицемия;

11. Внелегочной туберкулез;

12. Лимфома, саркома Капоши;

13. Кахексия;

14. ВИЧ-энцефалопатия.

В 1988 ВОЗ предложила в целях клинической диагностики проводить балловую оценку симптомов , имеющихся у подозреваемого на ВИЧ-инфекцию больного:

Персистирующая генерализованная лимфаденопатия 0

Изменения на коже и слизистых оболочках 1

Снижение массы тела 1

Выраженная утомляемость 1

Простой герпес 2

Диарея длительностью свыше 1 мес. 4

Лихорадка длительностью свыше 1 мес. 4

Снижение массы тела свыше 10% 4

Туберкулез легких 5

Рецидивирующая бактериальная инфекция 5

Лейкоплакия полости рта 5

Стоматит, молочница рта 5

Локализованная саркома Капоши 8

Кахексия 12

При этом сумма баллов от 0 до 3 оценивается как вероятность ВИЧ-инфекции очень мала, 4 -11 баллов - заболевание вероятно, а 12 и свыше - очень вероятно.

В целом клиническая диагностика ВИЧ-инфекции – это, прежде всего диагностика спектра СПИД-ассоциированной патологии у больного вторичным иммунодефицитом. Так как ВИЧ-индикаторные заболевания включают 23 нозологические формы, наиболее целесообразен синдромальный подход к диагностике. Почти всегда имеет место у больного синдром общей интоксикации (немотивированная слабость, вялость, быстрая утомляемость) развивающийся на фоне длительного субфебрилитета или лихорадки неясного генеза, чаще в ночное и утреннее время, сопровождающейся обильным потом. Постоянен синдром немотивированной генерализованной периферической лимфаденопатии, в 20% сопровождающийся гепато- спленомегалией различной степени выраженности. Один из ведущих синдромов болезни - синдром бронхо-легочной патологии, правда глубокие поражения легочной ткани в виде пневмоцистной пневмонии развиваются в далеко зашедших случаях болезни, ибо развивается пневмоцистоз на фоне глубокого иммунодефицита. Зато длительностью свыше 1 месяца синдром немотивированной диареи относится к рано появляющимся, для него характерна устойчивость к медикаментозной терапии. Один из синдромов ВИЧ-инфекции - волнообразно текущая артралгия неясной этиологии. К характернейшим проявлениям болезни следует отнести и синдром поражений кожи и слизистых, проявляющийся неспецифической макуло-папулезной сыпью, устойчивой к терапии стероидами экземой, стафилококковым импетиго. К дерматологическим проявлениям также относятся рецидивирующие грибковые (микоз, кандидоз, бактериальные (фолликулиты, фурункулез, гидроаденит), вирусные (герпес) поражения кожи и слизистых оболочек. Наконец, ВИЧ-инфекцию характеризуют и новообразования, в основном в виде саркомы Капоши и лимфомы, а также некоторых других видов опухолей.

Наличие у пациента не менее двух клинических и двух клинико-лабораторных (лейко- лифо- нейтропения, гипогаммаглобулинемия) из числа вышеперечисленных симптомов позволяет с высокой степенью уверенности диагностировать ВИЧ-инфекцию. Но в то же время в случае выявления двух из таких весьма часто встречающихся у больных синдромов, как лихорадка и лимфаденопатия, сохраняющихся на протяжении месяца и свыше, стойкая немотивированная диарея, снижение массы тела более чем на 10% или обильные ночные поты дают основание на постановку диагноза и тщательного лабораторного обследования.

В стадии 2а заболевание можно заподозрить только по симптому персистирующей генерализованной лимфаденопатии у больного из группы риска или при наличии эпиданамнеза.

В стадии 2б (ранней или слабовыраженной) еще сохраняется соматическое благополучеие, нормальная активность. Поражения кожи и слизистых оболочек нетяжелые, рецидивирующие инфекции респираторного тракта не носят генерализованного характера, потеря массы тела не превышает 10%.

Согласно рекомендациям ВОЗ, надежная клиническая диагностика ВИЧ-инфекции у взрослых и детей возможна при наличии одного из 12 СПИД-индикаторных заболевания: 1) кандидоз пищевода, трахеи, бронхов, легких; 2) внелегочной криптококкоз; 3) криптоспоридиоз с диареей более одного месяца; 4) цитомегаловирусное поражение какого-либо органа (за исключением и помимо печени, селезенки и лимфатических узлов у больного старше 1 месяца); 5) инфекция, обусловленная вирусом простого герпеса, персистирующая более 1 месяца у больного старше 1 месяца; 6) саркома Капоши у больного моложе 60 лет; 7) лимфома головного мозга у больного моложе 60 лет; 8) лимфоцитарная интерстициальная пневмония у ребенка до 13 лет, 9) диссеминированная инфекция, вызванная бактериями группы Micobacterium avium intracellulare или M.Kansassii; 10) пневмоцистная пневмония; 11) прогрессирующая многоочаговая лейкоэнцефалопатия; 12) токсоплазмоз центральной нервной системы у больных старше 1 месяца. Наличие одного из этих заболеваний позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию при отсутствии серологического иммуноферментного исследования крови или даже при получении серонегативного результата.

Не менее сложна дифференсация фаз болезни, т.е. разграничение стадий по клиническим критериям. По мнению специалистов CDC (США) наиболее объективный критерий - количество Т-хелперов, а не клинические проявления, ибо многие из этих состояний часто встречаются у лиц, не инфицированных ВИЧ. В 1991 году Центр определил, что постановка диагноза СПИД может быть в случаях, если: а) у инфицированного имеется одно из 23 СПИД-ассоциированных состояний или б) он ВИЧ-инфицирован и имеет менее 200 СD4+ клеток/ мм.

Лабораторное критерии ВИЧ-инфекции.

Обследованию на ВИЧ-инфекцию в первую очередь подлежат:

2 . Лица с клиникой кандидозного эзофагита, кандидоза бронхов и легких, диссеминированного или внелегочного кокцидиомикоза, пневмоцистной пневмонии, внелегочного криптококкоза, криптоспоридиоза с диареей юлительностью свыше 1 мес., цитомегаловирусного поражения внутренних органов кроме печени, селезенки, лимфатических узлов у больных старше 6 мес., цитмегаловируснго ретинита с потерей зрения, герпетической инфекции с многоочаговыми язвами длительностью свыше 1 мес., бронхитом, пневмонией или эзофагитом, рецидивирующего опоясывающего герпеса, дессиминированного или внелегочного гистоплазмоза, туберкулеза легких или внелегочного, изоспориоза с диареей длительностью свыше 1 мес., распространенной или внелегочной МАК-инфекции, прогрессирующей многофокусной лейкоэнцефалопатии, токсоплазмоза мозга, сальмонеллезной септицемии, саркомы Капоши, лимфомы, лимфоидной интерстициальной пневмонии (у детей)

В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используются различные методы обнаружения ВИЧ, антигенов и генного материала ВИЧ, а также методы обнаружения антител к ВИЧ. Все эти методы обладают различной эффективностью, требуют различного оборудования и разного уровня подготовки персонала. Результаты этих исследований требуют грамотной интерпретации.

Диагностика ВИЧ-инфекции включает 2 этапа: установление собственно факта зараженности ВИЧ и определение стадии заболевания. За определением стадии неразрывно следует выяснение характера течения заболевания, а затем формирование прогноза у данного больного, а также выбор тактики лечения.

Как известно, диагностика любого инфекционного заболевания основана на сопоставлении эпидемиологических, клинических и лабораторных данных, и преувеличение значения одной из групп этих данных может привести к диагностическим ошибкам.

С самого начала следует предупредить читателя, что при диагностике ВИЧ-инфекции типичной ошибкой является постановка диагноза на основании какого-либо одного лабораторного теста, к которому у врача по той или иной причине возникает чересчур сильное доверие. Некоторые работники лабораторий даже берут на себя смелость ставить диагноз ВИЧ-инфекции, никогда не видя больного. Иногда клиницисты также безоговорочно доверяют результатам лабораторных исследований, которые могут быть полезны только как «отдельные свидетели в деле вынесения окончательного приговора» пациенту. За те 15 лет, в течение которых мы наблюдаем ВИЧ-инфекцию в России, нам пришлось видеть десятки, если не сотни, случаев ошибок, связанных с фанатичным доверием некоторых врачей к результатам лабораторного исследования. Мы можем не останавливаться на сплошь и рядом встречающихся «обыкновенных» ошибках, которые возникают при перепутывании сывороток, неправильном заполнении документации и т. п. Клиницист обязан знать диагностическую ценность того или иного метода. Нам известен случай, когда в Санкт-Петербурге в результате неумелого использования какого-то «нового» метода один «ученый» выдал диагноз «ВИЧ-инфекция» совершенно здоровому и неинфицированному человеку (которого он, кстати, никогда не видел), в результате чего последний покончил с собой. Другой, не менее выдающийся «ученый» несколько лет доказывал руководству одной из бывших советских республик, что население этой страны «поражено эпидемией СПИДа», поскольку разработанный им «сверхчувствительный» метод исследования «выявляет ВИЧ-инфекцию у зараженных намного раньше, чем все другие известные методики». В обоих случаях речь, конечно, шла о ложных реакциях, которые давали их «новейшие методы».

Описан типичный случай «установления диагноза ВИЧ-инфекции (вирусологически)». Несмотря на то что у описываемого умершего мужчины 21 года отсутствовали достоверные факторы риска инфицирования ВИЧ в эпидемиологическом анамнезе, были отрицательными результаты исследования крови на антитела к ВИЧ, не было диагностировано ни одного типичного для ВИЧ-инфекции оппортунистического заболевания и был патологоанатомически поставлен диагноз «лимфогранулематоз с поражением костного мозга, печени, селезенки, лимфатических узлов кишечника», автор упомянутого описания (видимо, только в своей собственной статье) ставит ему «посмертный диагноз» ВИЧ-инфекции. Основанием для этого «ретроспективного» диагноза было упоминание, что материал от больного «исследовали с помощью молекулярной гибридизации с использованием радиоактивного зонда и выявили в мононуклеарных клетках наличие вирусспецифических последовательностей ВИЧ-1». По-видимому, автор статьи под сильным впечатлением вирусологической терминологии увидел на «этом примере исключительную ценность вирусологической диагностики по сравнению с серологической, особенно у детей младшего возраста».

Как мы уже отмечали, новые методы диагностики должны подтверждаться старыми, а не наоборот. Поэтому нашей общей рекомендацией для клиницистов и эпидемиологов является скептическое отношение ко всем «новейшим методикам» до тех пор, пока не станут известны все их достоинства и недостатки. В настоящее время это прямо касается диагностики на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) и прочих «генно-диагностических методов», с помощью которых отдельные исследователи уже «обнаружили СПИД у египетских мумий» и «уже начали обнаруживать его у крыс». Последние достижения лишь показывают, что для полной адаптации данных методик для нужд медицины потребуется еще несколько лет.

До последнего времени не прекращаются споры о том, можно ли диагностировать ВИЧ-инфекцию без лабораторного подтверждения. Это было бы предметом серьезной дискуссии, если бы в России не были повсеместно доступны методы обнаружения антител к ВИЧ. Но мы тем не менее придерживаемся мнения, что это вполне возможно. Мы наблюдали множество случаев, когда диагноз ВИЧ-инфекции не вызывал сомнения с момента сбора анамнеза и первого осмотра пациента. Нам трудно припомнить случай, чтобы типичная лимфаденопатия у выходца из Центральной или Восточной Африки не оказалась верным признаком ВИЧ-инфекции. Лишь у 2 молодых пациентов, которых нам пришлось консультировать, правда получавших перед этим массивную гормональную терапию, саркома Капоши на голове и теле не была проявлением ВИЧ-инфекции.

В силу сложившейся в России традиции миллионы людей обследуются на антитела к ВИЧ без определенных показаний, и в большинстве случаев врач сначала получает результаты исследования (положительная реакция на антитела к ВИЧ) и лишь потом видит самого больного и может его опросить.

Быстро забывается, что лабораторные данные служат лишь подтверждением клинических. В тех же случаях, когда врач уже знает, что у осматриваемого больного выявлены антитела к ВИЧ, он легко может ошибиться в постановке диагноза. Так, в 1985-1989 гг. нам пришлось осматривать десятки пациентов, которых со всех концов страны направляли в Москву из-за ложных лабораторных подтверждений ВИЧ-инфекции. В 1987-1995 гг. на один истинно положительный «лабораторный диагноз», основанный только на определении антител к ВИЧ методом иммуноферментного анализа (ИФА), приходилось до 2000-3000 ложных! Все люди с подобной реакцией раньше длительное время находились на диспансерном наблюдении, создавая много работы для сотрудников центров по профилактике и борьбе со СПИДом.

У 90-95% зараженных антитела к ВИЧ появляются в течение 3 мес после заражения, у 5-9% - через 6 мес и у 0,5-1% - в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител - 2 нед от момента заражения.

Практический интерес представляют случаи, когда пациент обследуется в инкубационном периоде или на стадии IIA ВИЧ-инфекции и количество антител в его крови еще слишком мало для выявления. Тем не менее при достаточном опыте инфекционисты довольно быстро распознают эти случаи. Так, например, однажды врач М.А. Бурчик, работавшая в боксовом отделении клинической инфекционной больницы № 2 Москвы, заподозрила ВИЧ-инфекцию у мужчины 44 лет, вернувшегося из поездки в США, страдавшего заболеванием, по клинике очень напоминавшим инфекционный мононуклеоз, и при первом обследовании серонегативного к ВИЧ. М.А. Бурчик справедливо заметила, что для моно-нуклеоза зрелый возраст пациента нетипичен, ведь Н.Ф. Филатов в свое время назвал его «детской железистой лихорадкой», а некоторые авторы, наблюдавшие его у взрослых, называли также «болезнью студентов и влюбленных», т.е. лиц молодого возраста. Повторное исследование на антитела к ВИЧ, произведенное через 1 нед, также дало отрицательные результаты. Однако М.А. Бурчик проявила настойчивость, и уже при третьем исследовании, выполненном через 1 мес после начала клинических проявлений, были обнаружены антитела к отдельным белкам ВИЧ, а в последующем - «полностью положительная» реакция на антитела к ВИЧ в иммунном блотинге. При последующем сборе эпидемиологического анамнеза выяснилось, что пациент имел гомосексуальные связи во время поездки в США, в результате чего и заразился ВИЧ.

К числу наиболее изученных и распространенных относится метод обнаружения антител к ВИЧ. Так как ВИЧ-инфекция в большинстве случаев длится пожизненно, то для диагностики достаточно самого факта обнаружения антител. При ВИЧ-инфекции в отличие от других инфекций в большинстве случаев нет необходимости использовать парные, т.е. взятые через определенный промежуток времени, сыворотки.

Обнаружение антител в принципе может выявить более 99% инфицированных ВИЧ людей. Некоторые сложности связаны с тем, что антитела к ВИЧ отсутствуют в первые недели после заражения, а в терминальной стадии заболевания их количество может заметно уменьшаться. Имеются сведения об отдельных, достаточно редких случаях ВИЧ-инфекции, когда антитела длительное время не обнаруживаются или исчезают на сравнительно большой срок.

Так, с 1995 по 1997 г. в США и Канаде были идентифицированы 8 пациентов с клиническими признаками ВИЧ-инфекции, у которых многократные исследования сывороток на наличие антител давали отрицательные результаты. У всех больных отмечались клинические проявления, соответствующие определению СПИДа, уровень СD4-лимфоцитов составлял менее 0,2 10 9 /л. Пробы на р24-антиген были положительными, как и результаты обнаружения РНК и ДНК ВИЧ. Исследование сывороток этих пациентов в нескольких тест-системах для обнаружения антител показало, что некоторые из них выявляют наличие антител к ВИЧ, а другие - нет. Исследование сывороток в иммунном блотинге у 4 из 8 пациентов обнаруживало наличие антител к протеинам ВИЧ, т.е. эти сыворотки могли расцениваться как сомнительные (неинтерпретируемый результат).

Предыдущее наблюдение подчеркивает необходимость комплексной оценки результатов обследования при диагностике ВИЧ-инфекции, так как во всех случаях заболевание было заподозрено на основании клинических проявлений. У ряда пациентов из этой группы можно было выявить в анамнезе половые связи с лицами, впоследствии заболевшими СПИДом. Эпидемиологическое значение таких случаев в целом невелико, так как они встречаются нечасто, однако теоретически они могут играть роль в возникновении отдельных вспышек, что следует принимать во внимание при проведении эпидемиологического расследования.

Еще раньше эксперты высказывали мнение, что отсутствие антител к ВИЧ через 6 мес после заражения встречается чрезвычайно редко и отрицательный результат исследования на антитела к ВИЧ в этот срок является скорее всего «веским аргументом против диагноза ВИЧ-инфекции». Описанные P. Sullivan и соавт. «серонегативные» случаи клинически выраженной ВИЧ-инфекции составляли лишь сотые доли процента от общего числа выявленных в США за тот же период времени больных СПИДом. Теоретически можно предполагать, что с увеличением заболеваемости ВИЧ-инфекцией в России абсолютное количество таких случаев будет увеличиваться и соответственно может возрасти роль серонегативных источников в эпидемическом процессе. Однако, поскольку качество диагностических тест-систем и их способность выявлять все более низкие концентрации антител возрастают, то эти расчеты могут и не иметь существенного значения.

Так как терминология, используемая при лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции далеко не всегда является понятной для практического врача, мы должны остановиться на ней более подробно.

Диагностическими тест-системами называют специальные наборы реактивов для обнаружения маркеров ВИЧ-инфекции. Чаще всего, как мы отметили выше, они предназначены для определения антител к ВИЧ. Главным их различием является лишь способ обнаружения реакции антитела с антигеном ВИЧ. Тест-системы различаются, кроме метода обнаружения реакции антиген-антитело, по подбору используемых антигенов ВИЧ, которые могут быть получены непосредственно из ВИЧ рекомбинантными методами или синтезированы из аминокислот, а также по подбору сопутствующих реактивов и дизайну. Практических врачей не должны смущать употребляемые чаще всего в рекламных целях выражения «тест-системы третьего поколения», «тест-системы нового поколения» и т.п. Фактически под этим скрывается только лишь использование новых ингредиентов, хотя на самом деле качество «тест-системы четвертого поколения» может быть значительно ниже, чем у тест-системы «первого поколения». Так, тест-системы с использованием в качестве антигена «вирусного лизата», т.е. разрушенного вируса, относят к «первому поколению», но по своей способности выявлять всех зараженных, имеющих антитела к ВИЧ, они могут превосходить «новые поколения».

Качественными характеристиками этих тестов являются способность выявлять максимальное число истинно положительных сывороток, т.е. сывороток, действительно содержащих антитела к ВИЧ (чувствительность тест-системы), и способность регистрировать минимальное число ложноположительных, т.е. дающих ложную реакцию с диагностикумом, сывороток (специфичность тест-системы). Если заявленная чувствительность теста составляет 99,9%, то это означает, что он выявляет 999 из 1000 сывороток, содержащих антитела, а одну сыворотку не выявляет. Если специфичность заявлена как 99,9%, то это значит, что тест прореагирует как положительный с одной из 1000 исследованных сывороток, в которых точно нет антител к ВИЧ.

Как правило, реальные чувствительность и специфичность тест-систем ниже заявленных производителями, и об их ценности можно судить в основном по результатам практического применения.

Вполне естественно, что наибольшее количество сывороток, содержащих антитела к ВИЧ, выявляют те тесты, которые содержат антигенные детерминанты, наиболее часто встречающиеся у ВИЧ-1. Но для того чтобы выявлять, например, и более редко встречающиеся сыворотки с антителами к ВИЧ-2 или субтипу О ВИЧ-1, в настоящее время приходится вводить в состав набора антигенов также и антигенные детерминанты, специфичные для этих вариантов, т.е. постоянно расширять набор антигенных детерминант. Неспособность тест-системы выявить как положительные некоторые содержащие антитела сыворотки приводит к ложноотрицатель-ным результатам, причиной которых могут быть как недостаточная чувствительность, связанная с неправильным подбором используемых реагентов, так и неадекватный подбор используемых антигенных детерминант.

Все известные тест-системы имеют некоторые ограничения по своей возможности выявлять все сыворотки, содержащие антитела к ВИЧ (по чувствительности), уже хотя бы потому, что количество этих антител может быть очень небольшим, особенно в начальном и финальном периодах болезни. Однако в модельных опытах с заранее известными заведомо положительными сыворотками («диагностическая панель сывороток») чувствительность некоторых тест-систем может достигать 100%, т.е. они выявляют все заведомо положительные сыворотки, использованные в данном эксперименте. При этом, разумеется, не следует забывать, что лица, проводящие испытания, могут случайно или сознательно подбирать сыворотки с теми или иными особенностями, что влияет на результат испытания.

В то же время и ложноположительные реакции присущи практически всем тест-системам. Это связано с тем, что в исследуемых материалах могут присутствовать антитела к антигенам, сходным с антигенами ВИЧ, или к примесям к антигену. Так, при классической методике получения антигена ВИЧ из лизата клеточных культур вируса в конечном продукте обнаруживаются фрагменты лимфоцитов, антитела к которым могут обусловливать ложные реакции и т.п. Отмечено, что по мере повышения чувствительности теста отмечается тенденция к увеличению числа ложноположитель-ных реакций.

На практике к этому добавляются также ложноотрицательные и ложноположительные результаты, возникающие из-за ошибок персонала, ухудшения качества тест-систем, обусловленного транспортировкой и неправильным хранением. Поэтому наряду со специфичностью и чувствительностью, определенными в лабораторных условиях, иногда определяют эти параметры в так называемых полевых условиях, т.е. в условиях практического здравоохранения. Как правило, специфичность и чувствительность, определенные в «полевых» условиях, вследствие указанных выше причин ниже лабораторных. На результаты использования тест-систем могут оказывать влияние даже такие факторы, как качество воды, используемой для промывания лабораторной посуды и т.п.

Чаще всего антитела к ВИЧ обнаруживают иммуноферментными методами. Принципиальных различий в многочисленных коммерческих тест-системах для твердофазного ИФА нет, хотя по чувствительности и специфичности они могут существенным образом различаться. Довольно часто случается так, что одни и те же сыворотки дают разные результаты при использовании разных тест-систем. В связи с этим признано, что положительный результат исследования в одной тест-системе нельзя считать безусловно положительным результатом.

Предложен и используется ряд методов для проверки специфичности результатов обнаружения антител. Среди этих методов наиболее часто применяют реакцию иммунного блотинга («иммуноблот» в модификации Western Blot. В этом красивом «ученом» названии «blot» переводится скорее всего как «клякса», a «western» - как «западная», что отражает направление распространения этой «кляксы» по бумаге слева направо, т.е. на географической карте это соответствует направлению с запада на восток). Суть метода иммунного блотинга заключается в том, что иммуноферментную реакцию проводят не со смесью антигенов, а с антигенами ВИЧ, предварительно распределенными методом иммунофореза по фракциям, располагающимся в соответствии с молекулярной массой по поверхности нитроцеллюлозной мембраны. В результате основные белки ВИЧ - носители антигенных детерминант - распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые и проявляются при проведении иммуноферментной реакции.

Сыворотки больных, инфицированных ВИЧ-1, обнаруживают антитела к следующим основным белкам и гликопротеинам: к структурным белкам оболочки (env) - gpl60, gpl20, gp41, ядра (gag) - pi7, p24, p55, а также ферментов вируса (pol) - p31, p51, р66. Для ВИЧ-2 типичны антитела к env - gpl40, gpl05, gp36, gag - pl6, p25, p56, pol - p68.

Среди лабораторных методов, необходимых для установления специфичности реакции, наибольшее признание получило обнаружение антител к белкам оболочки ВИЧ-1 (gp41, gpl20, gpl60) и ВИЧ-2 (gp36, gpl05, gpl40). Однако и здесь имеются некоторые расхождения между мнениями отдельных исследовательских групп.

Так, ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp 160, gp 120, gp 41) в сочетании с реакцией с другими белками или без нее, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование с использованием набора другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, рекомендуется наблюдение в течение 6 мес (исследование через 3 мес).

По нашему мнению, допустимо трактовать результаты как положительные и при наличии антител только к одному белку оболочки, особенно в тех случаях, когда речь идет об обследовании в очагах ВИЧ-инфекции. Совершенно очевидно, что в тех случаях, когда речь идет о сыворотке ребенка, находившегося в нозокомиальном очаге ВИЧ-инфекции, или реципиента крови от серопозитивного донора, или о половом партнере ВИЧ-инфицированного, диагностическая значимость положительной реакции резко возрастает. Здесь мы еще раз хотели бы обратить внимание читателя на то, что диагноз ВИЧ-инфекции устанавливается не на основании результатов лабораторных исследований, а при их сопоставлении с клиническими и эпидемиологическими данными. Так, именно в Элисте во время эпидемиологического расследования внутриболь-ничной вспышки мы наблюдали около 10 случаев, когда у инфицированных детей первоначально в реакции иммунного блотинга отмечались антитела только к одному гликопротеину env.

Наличие положительной реакции с антигеном р24 может указывать на период сероконверсии, так как антитела именно к этому белку иногда появляются первыми. В этом случае рекомендуется, в зависимости от клинических и эпидемиологических данных, повторить исследование с образцом сыворотки, взятым не ранее чем через 2 нед, и это является как раз тем случаем, когда при ВИЧ-инфекции необходимо исследование парных сывороток.

Положительные реакции с белками gag и pol без наличия реакции с белками env могут отражать стадию ранней сероконверсии, а также могут указывать на инфицированность ВИЧ-2 или на неспецифическую реакцию. Лиц с такими результатами после тестирования на ВИЧ-2 повторно обследуют через 3 мес (в течение 6 мес). Если через 6 мес вновь будут получены неопределенные результаты (отсутствие реакции с белками env ВИЧ-1 и ВИЧ-2), а также не будут выявлены факторы риска и клинические симптомы иммунодефицита, то обычно делают вывод о неспецифической реакции иммунного блотинга. Считается, что в случае истинной ВИЧ-инфекции обычно после нескольких месяцев наблюдения за спектром антител определяется положительная динамика, т.е. появление антител к прочим структурам ВИЧ, а на нитроцеллюлозе в реакции иммунного блотинга наблюдается появление недостающих для диагностики полос. Напротив, в случае ложной реакции результаты иммунного блотинга остаются неопределенными или становятся отрицательными, т.е. «подозрительные» полосы исчезают.

Эффективность диагностики ВИЧ-инфекции с помощью обнаружения антител в крови снижается тем, что антитела к ВИЧ могут не обнаруживаться в первые месяцы заражения или в терминальной стадии заболевания и, напротив, обнаруживаться в первые месяцы жизни у незараженных детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.

Так как у детей действительно обнаруживаются антитела к ВИЧ, то в данном случае реакцию нельзя назвать ложноположительной. С одной стороны, в течение 1-го года жизни в сыворотке крови ребенка циркулируют материнские антитела и, следовательно, обнаружение антител к ВИЧ у детей 1-го года жизни не является достаточным основанием для постановки диагноза ВИЧ-инфек-ции. С другой стороны, поскольку заражение ВИЧ в неонатальном периоде может индуцировать гипо- и агаммаглобулинемию, исчезновение антител не может считаться достаточным основанием для снятия диагноза ВИЧ-инфекции. В связи с этим дети, рожденные от ВИЧ-инфицированных матерей, должны были раньше клинически наблюдаться не менее чем в течение 36 мес после рождения. С появлением новых методов диагностики отмечается тенденция к сокращению сроков наблюдения. Обнаружение у таких детей антигенов ВИЧ или нуклеотидных последовательностей вируса может подтверждать диагноз ВИЧ-инфекции в более ранние сроки, однако отрицательные результаты таких исследований не позволяют его полностью отвергнуть (см. ниже). По истечении всего срока наблюдения вопрос о наличии у ребенка ВИЧ-инфекции решается на основании анализа комплекса клинических, иммунологических и серологических данных.

Недостатком наиболее распространенных в настоящее время иммуноферментных систем является необходимость применения специального оборудования для оценки результатов реакции: спектрофотометров с принадлежностями, которые могут включать компьютеры со специальными программами обсчета и т.п., что значительно увеличивает стоимость исследований и делает исследователя зависимым от многих условий, включая специальные помещения, электро- и водоснабжение.

Использование метода иммунного блотинга сильно лимитирует его высокая стоимость.

Иммунный блотинг, вопреки распространенному мнению, является менее чувствительным методом, чем твердофазный ИФА. Поэтому в некоторых странах допускают постановку серологического диагноза после обнаружения антител к ВИЧ с помощью нескольких тест-систем для твердофазного ИФА, различающихся по составу антигенов. Эффективность метода иммунного блотинга снижает обнаружение достаточно большого числа неинтерпретируемых, или неопределенных результатов.

Теоретически упрощает диагностику метод обнаружения антител к ВИЧ в слюне, который в настоящее время приближается по чувствительности к методу обнаружения антител в крови, но пока значительно уступает ему по специфичности, т.е. дает большее количество ложноположительных результатов.

Для «полевых» исследований в настоящее время предлагаются всякого рода упрощенные варианты тест-систем для обнаружения антител к ВИЧ. Их чувствительность и специфичность могут значительно колебаться.

В России в настоящее время стандартной процедурой лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к ВИЧ с последующим подтверждением их специфичности в иммунном блотинге.

Обнаружение антител к ВИЧ включает 2 этапа. На первом этапе проводится выявление суммарного спектра антител к антигенам ВИЧ с использованием различных тестов: иммуноферментных, агглютинационных, комбинированных, гребеночных, мембранно-фильтрационных или мембранно-диффузных. На втором этапе методом иммунного блотинга проводится определение антител к отдельным белкам вируса. В работе допустимо использование только тест-систем, разрешенных к применению Минздравом России. Диагностические процедуры должны проводиться только в соответствии с утвержденными инструкциями по применению соответствующих тестов.

Забор крови производят из локтевой вены в чистую сухую пробирку в количестве 3-5 мл. У новорожденных можно брать кровь из пупочной вены. Полученный материал (цельную кровь) не рекомендуется хранить более 12 ч при комнатной температуре и более 1 сут в холодильнике при 4-8 °С, так как наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. Сыворотку отделяют центрифугированием или обводкой крови по стенке пробирки пастеровской пипеткой либо стеклянной палочкой. Отделенную сыворотку переносят в чистую (лучше стерильную) пробирку, флакон или пластиковый контейнер, и в таком виде она может храниться до 7 дней при 4-8 °С. При работе следует соблюдать правила техники безопасности.

При получении первого положительного результата анализ проводят еще 2 раза (с той же сывороткой и в той же тест-системе).

При получении хотя бы еще одного положительного результата (2 положительных результата из 3 постановок в ИФА) сыворотку исследуют в другой тест-системе для определения суммарных антител к ВИЧ.

Первично положительную сыворотку, т.е. давшую 2 положительных результата в первой тест-системе, повторно исследуют в ИФА во второй (другой) тест-системе, выбранной для подтверждения.

При получении положительного результата анализа и во второй тест-системе сыворотку необходимо исследовать в реакции иммунного блотинга. При получении отрицательного результата во второй тест-системе сыворотку повторно исследуют в третьей тест-системе.

Если отрицательный результат получен и во второй, и в третьей тест-системе, выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ.

Если в третьей тест-системе получен положительный результат, сыворотку также следует направить на исследование в иммунном блотинге.

Результаты, полученные в иммунном блотинге, интерпретируются как положительные, сомнительные и отрицательные.

Положительными (позитивными) считаются пробы, в которых обнаруживаются антитела к двум или трем гликопротеинам ВИЧ, отрицательными (негативными) - сыворотки, в которых не обнаруживается антител ни к одному из антигенов (белков) ВИЧ. Пробы, в которых обнаруживаются антитела к одному гликопротеину ВИЧ и/или каким-либо протеинам ВИЧ, считаются сомнительными (неопределенными или неинтерпретируемыми).

При получении сомнительного результата с антителами к белкам сердцевины (gag) в иммунном блотинге с антигенами ВИЧ-1 проводится исследование с антигенами ВИЧ-2.

При получении положительных результатов иммунного блотинга делается заключение о наличии в исследуемом материале антител к ВИЧ.

При получении отрицательного результата анализа в иммунном блотинге выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ.

При получении неопределенного результата проводятся повторные исследования на антитела к ВИЧ через 3 мес и при сохранении неопределенных результатов - через 6 мес.

Если через 6 мес вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный. При наличии эпидемиологических и клинических показаний серологические исследования повторяются.

Особенностью серодиагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, является то, что как у зараженных, так и у незараженных детей в первые 6-12 мес жизни обнаруживаются антитела к ВИЧ материнского происхождения, которые затем могут исчезать. Критерием, свидетельствующим о наличии у ребенка ВИЧ-инфекции, является обнаружение у него антител к ВИЧ в возрасте 18 мес и старше. Отсутствие антител к ВИЧ у ребенка в возрасте 18 мес, рожденного от ВИЧ-инфицированной матери, является критерием, свидетельствующим против наличия у него ВИЧ-инфекции.

С целью диагностики используются также методы обнаружения вируса, его антигенов или генного материала (специфических нук-леотидных последовательностей).

Среди антигенов ВИЧ чаще всего пытаются обнаруживать белок р24 ВИЧ-1, однако эта методика не получила широкого применения в эпидемиологических исследованиях, так как большая часть антигена не связана антителами только в начальном периоде заболевания и в периоде развития клинически выраженного иммунодефицита. В связи с этим метод представляет интерес для выявления больных на ранних стадиях ВИЧ-инфекции и иногда для оценки прогрессирования заболевания (см. ниже). Обнаружение этого антигена у ребенка, рожденного от ВИЧ-инфицированной матери, может служить критерием при установлении у него диагноза ВИЧ-инфекции. Не исключено, впрочем, что могут быть разработаны модификации метода, позволяющие расширить его диагностическое применение.

Выделение и идентификация культуры ВИЧ являются достоверным признаком инфицирования ВИЧ, однако этот метод малодоступен, требует длительного времени, высокой квалификации исполнителей и специального оборудования. Поэтому выделение вируса и его идентификация проводятся только в научных целях. Современные методы позволяют выделять ВИЧ в подавляющем большинстве случаев или даже во всех случаях истинной ВИЧ-инфекции, если, конечно, исследователи имеют соответствующие навыки, проявляют упорство (делают многократные попытки выделения ВИЧ) и обладают большими денежными средствами, которые обеспечивают возможность использовать специальную вирусологическую лабораторию, оснащенную современной техникой и реактивами. Последнее условие, однако, существенно ограничивает использование этого подхода, и он обычно применяется только в ограниченных научных целях.

Следует помнить, что отрицательные результаты однократной попытки выделить ВИЧ не имеют никакого практического значения, так как такие попытки выделения ВИЧ бывают удачными лишь в половине случаев. Сообщение лаборатории о том, что ВИЧ удалось выделить, имеет большее диагностическое значение, однако все лаборатории делают заключения о том, что выделен именно ВИЧ, на основании своих проверочных тестов, и правильность этой проверки врач может оценивать лишь по степени своего доверия к данной вирусологической лаборатории. Мы неоднократно отмечали, что некоторым вирусологам удавалось якобы выделить ВИЧ из материалов, не имеющих никакого отношения к ВИЧ-инфицированным, например из материалов, полученных от больных ветряной оспой или эпидемическим паротитом или даже от здоровых (правильнее - не инфицированных ВИЧ) людей.

Существенной проблемой является также то, что идентификация вируса занимает сравнительно длительное время.

Наконец, в последние годы большой популярностью стал пользоваться метод обнаружения генного материала ВИЧ методами репликации (амплификации, размножения) специфических генных последовательностей, часто объединяемыми под названием одного из вариантов этого метода - «полимеразная цепная реакция». Как убедительно показано в обзоре литературы, посвященном развитию этого метода диагностики при ВИЧ-инфекции, чувствительность известных модификаций ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции составляет лишь 98%, т.е. они выявляют лишь 98% проб от ВИЧ-инфицированных лиц, что существенно ниже, чем при использовании ИФА (до 99,9%). Иными словами, эти модификации в 1998 г. были способны выявлять лишь 980 инфицированных из 1000, а не 999, как ИФА. По этой причине они не могут использоваться и как подтверждающие тесты, так как будут давать заведомо больше ложноотрицательных результатов, чем иммунный блотинг. Можно лишь не согласиться с А.Г. Шипу-линым и соавт., которые приписывают своей «любимой» реакции специфичность, близкую к 100%, хотя на самом деле эта реакция на практике ведет себя как чересчур чувствительная к внешним колебаниям и в неумелых руках и в недостаточно хорошо оборудованных лабораториях дает немалое количество неспецифических (ложноположительных) результатов. Специфичность ПЦР также зависит от подбора используемых в ней ингредиентов, в особенности так называемых праймеров, которые должны имитировать генные последовательности ВИЧ, но далеко не всегда могут быть точно подобраны. Неудачный подбор может приводить, в частности, к тому, что такие тесты могут с разным успехом выявлять разные субтипы ВИЧ-1, например выявлять субтип В и не выявлять субтипы А и G и т.д. Впрочем, разработка этих методик идет быстрыми темпами и не исключено скорое появление более качественных наборов стандартных реактивов. На практике врачи должны учитывать операционные характеристики предлагаемых им диагностических тестов, изначально предполагая, что их практическая ценность может быть существенно ниже заявляемой производителями.

Теоретическое преимущество ПЦР состоит в том, что она способна выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периодах, когда антител еще может не быть. Однако она пока не всегда может выявлять инфекцию в более поздних периодах. Это в будущем, возможно, будет иметь значение и при попытке диагностики ВИЧ-инфекции у лиц, получающих противоретро-вирусную терапию, когда уровень ВИЧ в крови значительно снижается. Совместное использование двух методик - ИФА и ПЦР, которое могло бы быть выходом из создавшейся ситуации, к сожалению, сделает исследования значительно дороже, тем более если они осуществляются в массовом масштабе.

В настоящее время в России разрешены к применению тест-системы для обнаружения генного материала ВИЧ. Эти тест-сис-темы могут давать положительные реакции на наличие маркеров ВИЧ на ранних стадиях ВИЧ-инфекции. Пока опыт их использования нельзя считать достаточно большим, мы рекомендуем придерживаться следующей тактики их применения. При обнаружении положительных результатов исследования на ВИЧ-инфекцию в тест-системах данных типов следует провести обследование на антитела к ВИЧ. При обнаружении антител нужно придерживаться стандартной диагностической тактики. При положительных результатах обследования на генные или антигенные маркеры ВИЧ и отрицательных результатах обследования на антитела к ВИЧ следует повторить исследования на антитела к ВИЧ через 3 и 6 мес.

Пока метод амплификации сравнительно успешно применяется только для диагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей. Как известно, диагностика ВИЧ-инфекции у них затруднена наличием на 1-м году жизни материнских антител к ВИЧ в крови, и у здоровых, и у зараженных детей. Но и здесь использование генно-инженерных методов имеет ограниченную ценность. По современным данным, положительный результат определения генного материала ВИЧ у ребенка в 1-й месяц жизни действительно свидетельствует о ВИЧ-инфекции с вероятностью 50-95%, а отрицательный с вероятностью 3-10% свидетельствует об отсутствии ВИЧ-инфекции. Таким образом, получается, что ребенок в возрасте до 1 мес с положительной ПЦР, возможно, инфицирован, а ребенок с отрицательной реакцией, весьма вероятно, не инфицирован. Повторные исследования материала от ребенка, сделанные через 1-2 мес, если их результат совпадает с первым, повышают точность диагноза, но не дают абсолютной уверенности. Положительный результат ПЦР, полученный в возрасте старше 4 мес (ближе к 6 мес), имеет большее диагностическое значение, в первую очередь потому, что концентрация ВИЧ в это время возрастает. По нашему мнению, на информативность результатов этой реакции в ранние сроки может влиять путь заражения ребенка (внутриутробно, перинатально или при грудном вскармливании), который, естественно, определяет и срок заражения. Вполне естественно, что у детей, заразившихся при грудном вскармливании, результаты ПЦР в первые дни жизни, скорее всего, будут отрицательными. Таким образом, складывается впечатление, что применение ПЦР для выявления ВИЧ-инфекции у детей тоже пока не является надежным способом ранней диагностики и, возможно, не будет иметь такого большого применения в будущем. Мы полагаем, что у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, необходимо применять меры профилактики, например химиопрофилактику ВИЧ-инфекции, а тем более необходимо отменять грудное вскармливание независимо от предварительных результатов ПЦР. Специалисты из США рекомендуют применять противоретровирусную (превентивную) терапию для профилактики ВИЧ-инфекции у новорожденных детей ВИЧ-инфицированных матерей без специальных ссылок на результаты ПЦР-диагностики . Вероятно, противоретровирусная химиоп-рофилактика ВИЧ-инфекции может влиять на эффективность диагностики, так как при ней концентрация ВИЧ, естественно, может снижаться до неопределяемого уровня. Это означает, что у лиц, получающих противоретровирусные препараты с целью предупреждения заражения, окончательную диагностику с помощью ПЦР следует проводить только по окончании приема препаратов.

Впрочем, реакции типа ПЦР уже нашли свое место в диагностике ВИЧ-инфекции. Сейчас они успешно используются для прогнозирования течения заболевания и оценки эффективности терапии, определения количественных показателей присутствия ВИЧ в биологических жидкостях, о чем мы подробнее расскажем в следующих главах.

При ВИЧ-инфекции могут наблюдаться такие неспецифические изменения лабораторных показателей, как снижение уровня СD4-лимфоцитов, повышение процентного содержания СD8-лимфоцитов, повышение уровня Р2-микроглобулина, неоптерина, увеличение количества иммуноглобулинов и др. Обнаружение этих признаков является дополнительным свидетельством в пользу диагноза ВИЧ-инфекции. Однако эти изменения могут отсутствовать на определенных стадиях ВИЧ-инфекции (см. ниже), иметь индивидуальные колебания у разных пациентов, встречаться при других заболеваниях.

Как мы уже подчеркивали, диагностика ВИЧ-инфекции включает 2 последовательных этапа, имеющих самостоятельные цели:

• 1. Установление собственно диагноза ВИЧ-инфекции, т.е. определение состояния инфицированности ВИЧ.
• 2. Установление клинического диагноза, т.е. определение стадии и характера течения ВИЧ-инфекции.

Своевременная констатация состояния инфицированности ВИЧ имеет большое значение для проведения противоэпидемических мероприятий и ведет к важным правовым и социальным последствиям. Уже при возникновении малейшего подозрения на заражение ВИЧ часто необходимо принимать некоторые неотложные меры по предупреждению возможного распространения ВИЧ, например исключить переливание подозрительной на заражение крови. При обнаружении ВИЧ-инфицированного он отстраняется от донорства, подвергается консультированию, которое может уменьшить дальнейшее распространение ВИЧ. Проводимое при его выявлении эпидемиологическое расследование позволяет выявить пути передачи ВИЧ, которые в ряде случаев (например, при внутри-больничных вспышках) можно быстро прервать. Эпидемиологическое расследование выявляет другие источники инфекции, а также лиц, подвергающихся риску заражения.

Установление клинического диагноза проводится с целью оказания адекватной состоянию больного медицинской помощи. Эта помощь должна включать не только медикаментозную терапию, но и психологическую поддержку. Последнее мероприятие также имеет некоторое противоэпидемическое значение.

Независимо от цели диагностика ВИЧ-инфекции осуществляется путем комплексной оценки данных клинического обследования, результатов эпидемиологического расследования и лабораторных исследований.

При этом в первое время после возникновения подозрения на наличие ВИЧ-инфекции как у инфекциониста, так и у эпидемиолога может просто не хватать данных для постановки окончательного диагноза. Результаты всех лабораторных исследований могут быть получены только через несколько недель, а полные эпидемиологические данные могут и вовсе никогда не быть получены. Достаточно часто у опытных специалистов возникают сомнения в ценности или достоверности лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. Иногда диагностическое решение приходится принимать и при отсутствии возможности провести даже клинический осмотр, не говоря уже о возможности осуществить полное клиническое обследование.